动物源性食品中寄生虫的检测——囊尾蚴

（8）每孔加终止液2滴，以终止反应。

（9）判定在对照孔成立的前提下，即在标准阳性孔呈深黄色，标准阴性孔呈无色或浅黄色，空白孔呈无色，判定检测结果。先目测判定：与标准阴性孔相比，颜色深于标准阴性孔，即判定为ELISA阳性病猪（＋）。还可以用酶联免疫检测仪判定（490nm）。以空白对照孔调零，测定被检孔OD值。当OD≤0.22，判定为ELISA阴性（－）；OD≥0.26，判定为ELISA阳性（＋）；当0.23≤OD≤0.25，判定为ELISA疑似（±），疑似者复检一次，仍为疑似则判为阳性。

囊尾蚴抗体检测只反应有寄生虫存在，而抗原检测能表明体内寄生虫是活的。最理想的情况是两者的结合试验。血清学试验用的各种天然抗原来源于囊液，这些天然抗原还可以作为有用的血清学筛查工具。不同的方法使用不同的可溶性抗原使试验结果难以对比。囊尾蚴病检测抗原多为猪囊尾蚴囊液粗抗原或层析纯化抗原，主要包括以下几类：①小扁豆凝集素纯化抗原成分（猪囊尾蚴13ku、14ku、18ku、21ku、24ku、39～42ku或50ku糖蛋白）；②囊尾蚴囊液抗原成分；③头节囊壁抗原成分。

囊尾蚴感染人或动物后，在血清、脑脊液、口水甚至泪水中都可以检测到相应的抗体。放射免疫、血凝试验、胶体金、补体结合、酶联免疫反应和免疫印迹技术等已经用于检测感染的人或动物的囊尾蚴病抗体。最初抗原是来源于囊液、排泄物Ｇ分泌物（ES）产品或粗匀浆，这些未纯化的抗原敏感性和特异性较差，易出现假阳性、假阴性和交叉反应；因此开发使用提纯的抗原或在囊液中寻找特异性抗原。目前特异性最好的方法是酶联免疫电转移印迹（EITB）技术，最初报道有100％的特异性、98％的敏感性。然而，这种方法在大脑单囊肿病的诊断中敏感性大幅下降。Prabhakaran等报道了一种敏感的免疫诊断方法（用尿素诱导的扁豆凝集素的三级构象）。用这种方法对60例猪囊尾蚴病的患者进行诊断，检测到其中46％的患者血清中存在抗体，而用标准免疫印迹诊断方法检测为阴性。这个商品化的EITB试剂盒可以直接购买到，已经广泛用于诊断人类和猪囊尾蚴病，但是该方法也存在一定的弊端，如抗原来源不能保证，抗原的制备困难，抗原之间存在差异，探针杂交技术成本昂贵等。为解决这些问题，对这些抗原进行鉴定、分析并人工合成，用LISA进行猪囊尾蚴病的诊断测试。通过ELISA检测，发现这些合成的蛋白质特异性和敏感性远低于天然的糖蛋白抗原（LLGP）蛋白。Prasad报道了一种新的检测囊液抗原诱导的淋巴细胞增殖反应的免疫诊断技术。该技术基于囊肿液抗原，通过淋巴细胞增殖试验来衡量囊尾蚴刺激机体产生的细胞免疫反应。研究人员报道，测试组48个和对照组79个的特异性和敏感性分别为93.8％和96.2％。

检测囊尾蚴的另外一种方法就是进行抗原的检测。目前科研人员已经建立了几种检测方法用于检测血清中的囊尾蚴抗原。B158/B60和HP10两个单克隆抗体已经通过验证并且用于常规检测囊尾蚴抗原，据报道其敏感性非常高，血清样品达80％，脑脊液达90％。在猪囊尾蚴病流行病学调查中，研究人员统计了B158/B60和HP10的灵敏度和特异性，B158/B60和HP10的灵敏度分别为84％和76％，特异性分别为55％和83％。B158/B60在人类的尿抗原检测中也有良好的诊断性能，寄生虫敏感性为92％（而单囊尾蚴感染的病例下降到62.5％）。只有钙化的囊尾蚴的大多数病人（83％）检测结果阴性。血清和尿液的诊断结果一致性非常好，所以在检测过程中可以用尿或唾液作为诊断样品替代脑脊液、血清样品，可大大简化囊尾蚴病的筛检流程。

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