两种脲酶活性定性测定方法及比较

时间：2010-10-11 点击：次来源：阳光畜牧网作者：阳光畜牧网 - 小 + 大

    随着膨化技术在饲料工业中推广普及，越来越多的饲料生产商在配方中使用膨化大豆粉，与其它蛋白资源一样，大豆的适度熟化非常重要，熟化程度低会含抗胰蛋白酶等营养抑制因子，熟化度过高又会导致氨基酸利用率低。判断膨化大豆粉是否合格的主要指标是脲酶活性。脲酶活性是指：在30±5℃和PH值等于7的条件下，每分钟每克膨化大豆分解尿素所释放的氨态氮的毫克数。脲酶本身无营养意义，但它与抗胰蛋白酶的含量接近，并且遇热变性失活的程度与抗胰蛋白酶相似，因此，尿酶活性用来作为膨化大豆加热是否合适的间接估测指标。脲酶活性没有负值，最低为0。在我国现行的国标推荐值为0.3，在美国一般认为以不超过0.2为宜，并且针对日粮中有尿素的反刍动物而言不得超过0.12，当然对于家禽和猪0.3或稍高都可以接受。国内很多大企业一般均采用0.2。
    实验室定量测定脲酶活性的方法较复杂，有滴定法和pH增值法两种，已有研究表明两者对同一样品测得的数值也不相等。目前国内绝大部分企业都采用快速而简单的简易判定方法定性地估测脲酶活性，一般来说，主要有如下两种方法。
    一.液态法
    1.原理：大豆制品中的脲酶可使尿素分解成氨，会使酚红指示剂改变颜色。
    2.试剂
    2.1尿素:GB696，分析纯。
    2.2酚红指示剂
    2.2.1称取0.1g酚红，加1.43mL0.1mol/L氢氧化钠溶液，在研钵中研磨以促溶解；
    2.2.2转移至250mL定量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀备用。
    3.操作方法
    3.1取0.2g粉末样品，置于25mL比色管中。
    3.2加0.02g尿素，加酚红指示剂2滴，再加水20mL，充分摇匀15s。
    3.3记录粉红色出现时间，并根据时间判断尿酶活性，颜色出现时间应少于15min。
    颜色出现时间脲酶活性
    1min 极强     1～5min 强     5～15min 稍有 15min 无同时作空白对照试验。
    样品空白(不加尿素)及试剂空白(不加样品)，只有上述空白正常时，即酚红指示剂不改变颜色，试验结果才是可靠的。
    一般企业认为7、8分钟变色较为合适。
    二、半固态法
    1.原理：大豆制品中的脲酶可使尿素分解成氨，会使酚红指示剂改变颜色。
    2.试剂
    2.1稀硫酸（H2SO4）0.2N。
    2.2尿素一酚红试剂
    2.2.1将1.2克酚红溶解于30ml0.2N的NaOH中；
    2.2.2用蒸馏水将之稀释至约300mL；
    2.2.3加入90g尿素（分析纯）并溶解之；
    2.2.4用蒸馏水稀释至2L；
    2.2.5加入14mL 1.0N的H2SO4或70mL o.2N的H2SO4；
    2.2.6用蒸馏水稀释至最后体积3L；
    2.2.7溶液应具明亮的琥珀色。

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