3.氯霉素的残留分析
3.1 各种残留分析方法 氯霉素残留方法的建立始于20世纪七八十年代，到现在为止，已相继建立起了气相色谱、液相色谱、薄层色谱、放射性分析、微生物法及免疫学检测等方法。最为灵敏的气相色谱检测方法是1974年10月在AOAC年会上，Jacabson等提出的。德国Russel首先报道了液相色谱法检测氯霉素的残留。Arnold和Somogyl建立了放射免疫分析试验方法，Camphell等建立了酶联免疫吸附测定法。另外还有人采用单克隆抗体竞争性酶联免疫法测定猪肌肉组织中氯霉素残留。检测限为25ug/ml。更灵敏的亲合素-生物素酶联免疫吸附测定法也已成功建立。检测限达10ug/kg。目前已有测定氯霉素的试剂盒，如EMIT试剂盒，Lacartr Test试剂盒[9]。
3.2氯霉素残留分析的性状
3.2.1 国外现状 1992年，Nagata等报道了用液相色谱法测定动物肌肉和养殖鱼肌肉中的甲砜氯霉素和氯霉素的残留。试样用乙酸乙酯提取，提取液浓缩干燥后的残留物熔于3%的NaCl溶液，正己烷脱脂，水相用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯浓缩干燥后用正丁烷溶解，通过Sep-paK Horisil柱净化后，用ODS柱分离，225和227nm检测，当氯霉素为0.1ug/g时，平均回收率大于74.1%，检出限量为0.01ug/g[10]。Arnold等报道了肉、蛋、奶中氯霉素的放射免疫痕量分析，对于用氯霉素治疗的动物组织和其他可食用产品，此方法检出限量为0.2ug/kg，1 ug/kg以上的氯霉素残留能被准确定量，在蛋、肉中平均回收率为85%，在奶中回收率高于95%[11]。1984年Gwendolyn等用竞争酶联免疫法测定牛肌肉组织中氯霉素残留,最低检出限量可达1ug/kg，特异性也很好。另外还有采用单克隆抗体竞争性酶联免疫法测定猪肌肉组织中氯霉素残留的报道。随着研究工作的深入发展已有测定氯霉素的试剂盒投放市场，如 EMIT试剂盒，用于经氯霉素治疗后人血清中氯霉素含量的分析，此试剂盒主要适用于医用日常分析，该方法与高效液相色谱法及微生物学方法相比较具有明显的优点。经大量试验，D J Berry等曾提出用EMIT试剂盒的酶免疫法代替高效液相色谱法，但它灵敏度不高，只能检测2 5mg/kg以上氯霉素的含量。后来荷兰推出了测定氯霉素残留的酶联免疫测定试剂盒Quik card，现又称Lacartr test试剂盒，该试剂盒可测定牛、羊、猪等肌肉中氯霉素残留，检出限量为1～3ug/kg，也有人用它检测牛奶中氯霉素的残留，试样不经预处理检出限量为5～10 ug/kg，样品经预处理及浓缩后检出限量可达1 ug/kg以下，也有用它检测鸡蛋、尿液中氯霉素的报道。另外，还有用单克隆抗体亲合素—生物素酶联免疫法测定猪肌肉组织中和牛奶中氯霉素残留的方法[12]。
3.2.2 国内现状 1998年陈家华建立了家禽组织中氯霉素残留的快速检测，用乙酸乙酯提取样品，将氯霉素硝基基团在酸性条件下用氢还原，按照Nielsen(1975)的纯胺NET（N-1-萘乙二胺盐酸盐0.8%＋EDTA0.1%）溶液衍生偶合法，形成红紫色的N-1- 萘乙二胺氯霉素筛选家禽是否含有氯霉素。氯霉素检测限为10ng/g，样品中含四环素类、青霉素类、氨基糖苷类、红霉素、新酶素、头饱菌素类均不干扰测定[13]。为了快速、简便、灵敏地测定牛奶中的氯霉素残留,，2003年中国疾控中心营养与食品安全所的蒋定国、杨大进等建立了高效液相色谱分析法。此分析法把牛奶样品先用含有1%高氯酸的乙酸乙酯沉淀蛋白质和提取氯霉素，提取液浓缩干燥后用0.5mol/l高氯酸溶液溶解，以正己烷去除脂溶性杂质，在波长278nm处用高效液相色谱仪测定氯霉素。本方法最低检出浓度为1 1 ug/kg，氯霉素浓度在20～100 ug/kg范围内，此方法平均回收率为88.0%～97. 7%，RSD为5 3%～6 4%。本方法适于牛奶中氯霉素残留的监测[14]。2002年何方洋等用重氮化方法将氯霉素与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联，制备免疫抗原和包被抗原，用ELISA方法进行鉴定。将偶联抗原用弗氏佐剂乳化后免疫德国大白兔，制备多克隆抗体，并用硫酸铵沉淀法初步纯化，用亲和层析法进一步纯化。用所得抗体建立竞争酶联免疫吸附分析法(ELISA) 检测氯霉素，最低检测限为0.3ng/ml［15］。
4.展望
随着人们生活水平的提高，动物性食品（肉、蛋、奶）的需求不断增大。而药物在动物疾病防治中起着极大的作用，给养殖业带来经济效益的同时也引起人们的忧患。目前，消费者对食品的安全性越来越关注，一个重要的关注点就是药物在畜产品中的残留。因此，药物在动物体内和动物性产品中的残留问题已引起世界各国广泛重视，并投入大量资金对某些药物特别是化学治疗药进行研究。1986年，联合国成立“食品兽药残留立法委员会”，目的是制定世界或地区性法规标准，我国也制定了“肉食制品中药物残留限量”的规定，1994年，农业部颁布了关于“动物性食品中兽药最高残留限量（试行）”的规定。美国从1998年1月开始实施“公害分析临界控制点”（HACCP）,明确规定了食物中的有害物质（包括细菌、药残等）的临界值，超标的一律不准上市。欧盟兽医药委员会很早就特别提出禁止在哺乳期的动物和蛋鸡中使用氯霉素。《各国食品和饲料中农药兽药残留限量大全》中关于氯霉素的残留限量如下：日本规定牛肉、猪肉、鸡肉、鳗鱼和虾中对抗生素类规定不得检出。韩国规定不得检出牛肉、猪肉、鸡肉等可食性组织中的氯霉素。欧共体规定所有生产食品的动物肌肉、肝脏、肾脏、脂肪、和乳中氯霉素的最高残留量为0.01mg/kg。在1997年我国发布的兽药残留标准规定：氯霉素在可食性组织中的残留量为0.01mg/kg。
近年来，我国动物源性食品的出口受到了国外药残检验的拒收、扣留、退货、索赔、和终止合同等，这种事件时有发生，给我国的对外贸易造成很大的损失。因此，我们必须采取相应的措施来克服这种残留，我们必须研究药物在动物体内的代谢和变化规律，直到临床合理用药。研究组织中药物的残留检测方法，以便快速准确的对药物进行监测，防止药物残留的发生。还需要养殖业者改变传统的养殖观念，加强学习和培养新技术，走防病养殖的健康养殖之路。防患于未然，用药在预防[16 17 18 19 20]。
参考文献（略）
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