荧光定量PCR常见问题解答

（3）使用了质量比较差的耗材

目前市面上荧光定量PCR耗材种类繁多，质量也是良莠不齐，在耗材选择上尽量选择质量、品牌好一点的，切莫因为便宜选用质量很差或不符合要求的耗材，否则会引起一系列问题，造成不必要的时间、精力和试剂、样本的浪费。质量不好的耗材可能会引起荧光值不稳定，会导致反应孔的自动基线扣除错误，CT值判读不准确；

如上图：质量不好的耗材引起荧光值不稳定

如果使用的反应板封膜质量不好，在PCR过程中受到水蒸气的影响，容易产生变形，这样会引起“光学扭曲”现象。

如图所示：PCR过程中水蒸气使得封膜变形

除耗材外，荧光定量PCR仪器种类繁多，所有跟仪器配套使用的配件也要检查是否使用正确。

3 确保所用试剂是否正常

如果设置都正确，耗材及配件也都没问题，但是扩增曲线还是异常，这时候要确定下所用试剂是否正常。

首先要确定试剂是否有效（有效期），是否反复冻融多次，运输条件是否正常。

其次要观察扩增完的试剂体积，如果在扩增过程中有试剂的蒸发，可能会引起扩增曲线异常现象，所以在加完试剂上机前，一定要检查耗材是否已经密封，防止试剂蒸发，试剂蒸发严重的还可能导致整个实验室的气溶胶污染。

首页前一页123456后一页尾页