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猪蓝耳病免疫抗体监测问题探讨

时间:2009-11-11    点击: 次    来源:阳光畜牧网    作者:金颜辉等 - 小 + 大

金颜辉*1 黄盛兴2 黄雁1
(1 福建省动物疫病预防控制中心 350003;
2 建瓯市小松镇畜牧兽医站 353111)

          摘要:一组实验猪场应用PRRS灭活疫苗免疫猪场生猪,采集同一份猪血清ELISA试剂盒检测,测不出免疫抗体(0∕14),金标检出阳性率(9∕14)64.28%;另一组用进口减毒活苗免疫的同一份猪血清ELISA检出阳性数百分百(16∕16),金标检不出(0∕16)。另一实验猪场灭活苗两次免疫,金标检出阳性率(16∕21)76.19%,ELISA检不出;活疫苗两次免疫, ELISA检出阳性率(16∕21)76.19%,金标检不出。结论不同疫苗免疫效果,用不同检测方法,结果差异很大。
         关键词:猪蓝耳病,抗体,监测

         猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由PRRSV引起的一种高度接触性的传染病,以引起母猪繁殖障碍、仔猪和育成猪呼吸道症状及高死亡率为主要特征。该病于1987年首次在北美发现[1],之后在世界范围内迅速传播,我国于1996年首次分离到该病毒[2],最近几年PRRSV也已成为我国重要的猪传染病病原之一。特别是2006年出现变异毒株后,对我国养猪业造成了更加严重的危害和经济损失[3]。
  针对目前我国猪蓝耳病疫苗免疫后抗体水平监测中存在的一些问题,我们应用猪蓝耳病金标试纸条及进口ELISA试剂盒,对经猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗(NVDC-JXA1株)和进口减毒活疫苗免疫后采集的猪血清进行比对实验。
  免疫程序为: 18日龄分两组免疫,灭活疫苗组免疫20天后采血清样检测,同一份血清检测结果:灭活苗免疫组ELISA检测血清抗体滴度检不出(0∕14),金标检出阳性率(9∕14)64.28%;进口减毒活疫苗用同样免疫程序,采血清样检测ELISA检出阳性率百分百(16∕16),金标检不出。另一猪场实验结果:免疫程序为 疫苗两次免疫间隔两周,二免后28天采血样检测,灭活疫苗免疫的ELISA检不出(0∕21),金标检出阳性率(16∕21)76.19%,活苗免疫的ELISA检出阳性率(16∕21)76.19%,金标检不出;金标检测中的3份阴性ELISA检测是阳性, ELISA检测中的3份阴性金标检测是阳性。
        1 材料与方法
        1.1 材料
         选取两处健康猪场,经猪蓝耳病弱毒疫苗及灭活疫苗免疫后,采血,按常规方法分离血清,备检。
        1.2 试剂盒
        猪蓝耳病抗体检测试剂盒(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus Antibody Test Kit)购自IDEXX公司;猪蓝耳病金标试纸条来自本中心福建省科技厅(2007)重大科技项目专题二“福建省畜禽重大疫病诊断及防治技术研究”课题组提供。
        1.3 操作步骤
        1.3.1 ELISA试剂盒:按试剂盒说明书,应用猪蓝耳病抗体检测试剂盒对采集的猪血清进行抗体检测,步骤如下:血清用样品稀释液进行40倍稀释,浓缩洗液恢复到室温后混匀并用去离子水做10倍稀释。在试剂盒自带96孔板的C1、D1、C2、D2中加入100ul未稀释的阴性对照样品,在A1、B1、A2、B2孔中加入100ul未稀释的阳性对照样品,被检样品各加两孔,每孔100ul。室温孵育30min,甩去液体,每孔用洗液300ul清洗3-5次。每孔加入100ul酶标抗体,室温孵育30min。甩去液体,每孔用洗液300ul清洗3-5次。每孔加入100ul TMB底物溶液,室温孵育15min。加入100ul终止液并读取OD650nm。按试剂盒给定计算公式进行判定。

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