非洲猪瘟检测与实验室质量控制

非洲猪瘟严重威胁着我国养猪业的发展，实验室检测一直是防控该病的重要手段。检测结果的准确性将决定猪场的生死存亡。那么，在实验室检测中应该注意哪些问题，实验结果如何验证？

2018年8月在沈阳发现了第一例的非洲猪瘟疫情，经过测序发现我国流行的非洲猪瘟是和格鲁吉亚同属一个进化分支，即基因二型，从此我国就开始了非洲猪瘟的检测工作。2019年初中国动物疫病预防控制中心受农业农村部的委托，开始了两次非洲猪瘟核酸检测试剂的评价工作，2019年5月农业部发布172号公告，要求所有跟猪用生物制品及相关猪源原辅材料都要进行非洲猪瘟核酸检测，确保产品或原料的质量。2019年12月，我国发布了两个非洲猪瘟的标准物质，这标志着我们的检测更加重视质量。

要做好检测，必须从三个方面着手：一是性能验证，即在临床标本检测前，实验室应对核酸提取试剂、提取仪、扩增试剂、扩增仪等组成的检测系统进行必要的性能验证。二是室内质控，要求每批检测至少有1份弱阳性质控品、3份阴性质控品；物品和环境样本的采集检测，还需在采样前及采样过程中至少设一个现场空白样本及一个运输空白样本，以进行过程中的质量控制。三是室间质评，以检验是否存在偏差。

非洲猪瘟检测

2021年国家非洲猪瘟参考实验室发布了《养猪场非洲猪瘟变异株监测技术指南》，原来以P72检测为主，指南发布之后要求进行P72、CD2v、MGF三个基因缺失的检测。2011年11月，由中国动物疫病预防控制中心又发布了《养殖场非洲猪瘟变异株防控技术指南》，指南中除了要求检测P72、CD2v、MGF，还建议检测EGFP和mCherry。2021年7月，中国动物疫病预防控制中心发布了非洲猪瘟抗体检测试剂盒评价名单，这33个产品有三种ELISA方法：间接ELISA、阻断ELISA、双抗原夹心ELISA。原霖博士提醒，不管用哪种ELISA方法都可能出现假阳性或假阴性，这可能与血清的质量或操作有关。当出现假阳性时，最好用两种不同原理的试剂盒，重复采样再进行检测。针对国内有基因二型和一型流行的情况，在进行核酸检测时，要对试剂盒进行评估，是能同时检测到基因一型、二型，还是只能检到一种基因型。

目前被世界认可并广泛运用的有两种方法，进行核酸检测最理想的是荧光定量PCR，进行血清学检测常用的是ELISA方法。ELISA方法主要针对群体，用于个体检测如果出现假阳性怎么识别呢？原霖博士提出，我国推荐使用间接免疫荧光IFA的方法进行确诊，它的灵敏性要高于ELISA，适用于早期筛查；而且有了免疫荧光法作为ASFV抗体检测的金标准，就可以排除一些非特异性干扰，还可以测血清效价。

实验室室内质量控制

室内质量控制主要是对我们的检测体系，即对人、机、料、法、环的不同环节进行对比验证。原霖博士提到，每一次的检测都可能出现偶然误差或者系统误差，怎么去识别呢？就是要求每一次的检测都要有第三方的质控品，只有质控品成立的情况下，我们才能出具相关的检测报告。目前还存在一个误区，认为样品送到室验室后检测流程开始，其实检测流程从采样就开始了，而这个环节是我们兽医最容易忽视的，因为我们的采样环节不规范、运输过程不规范，最终导致不能得到一个有效的结果。因此，从样品采集开始就要重视，直到整个流程完成。

特别强调样品采集时拭子的选择，棉拭子吸水量多，但病毒的释放效率不高，由于棉花里其他有机物的影响，会对病毒产生一定的降解作用，因此最好选择植绒材质的拭子加保存液，以减少病毒降解。

室间质量评价非常重要，因为我们不知道是否存在系统误差，导致检测结果都偏高或偏低，所以需要定期进行实验室间的比对。能力验证能给我们提供一个很好的机会和其他实验室进行比较，通过统计学方法，帮助我们分析出更多的数据来。