应对非洲猪瘟，猪场日常管理生物安全细节（三）

11. 样品选取和采集过程中的注意事项

（1）合理取材。不同疫病要求采取的病料不同。怀疑非洲猪瘟时，应按照《非洲猪瘟防治技术规范》的要求采集病料，确保送检样品合格、规范，方便后续的实验室检测工作。如果怀疑除非洲猪瘟外还有多种疫病同时感染，应综合考虑，全面取材，或根据临床和病理变化有侧重地取材。

（2）剖检取材之前，应先对病情，病史加以了解，并详细进行临床检查。取材时，应选择临床症状明显，病变变化典型，有代表性的病猪。最好能选送未经抗菌药物治疗的病例和发病猪生前活体样品送检。

（3）病死猪要及时取材，夏季不超过 4h，若死亡时间过长，则组织变性、腐败，影响检测结果。

（4）除病理组织学检验病料及胃肠内容物外，其他病料应无菌采取，器械及盛病料的容器须事先灭菌。

①刀、剪子、镊子、针头等金属制品需高压灭菌，尽可能采用一次性无菌注射器；

②试管、平皿、棉拭子等可高压灭菌或干热灭菌；

③载玻片事先洗擦干净并灭菌。

（5）为了减少污染机会，一般应先采取微生物学检验材料，再取病理组织学检验材料。

（6）牢记生物安全原则。

①样品采集人员做好个人防护，防止感染人兽共患病；

②防止污染环境，避免人为散播疫病；

③做好环境消毒和动物尸体的处理。

三、待检样品的保存

待检的组织病料、血液、血清、体液、分泌物等待检样品必须保持新鲜，避免交叉污染和腐败变质。采样后如不能立即送检，应根据样品类别以及检测目的不同分类保存，以免影响检测结果的质量。一般情况下，所有拟送检样品均应低温，冷藏保存和运输。

血清或抗凝全血送检前可放置于 4℃保存，之后冷藏运送至检测实验室。实验室收到样品后如果不能立即检测，应置于 -20℃保仔，或 -80℃长期保存。用于病毒分离或攻毒试验诊断的抗凝全血样品，应尽可能低温冷藏运送至检测实验室，到达实验室后立即存放于 -70℃以下，以确保病毒不丧失感染性。ASFV 抗体和提取的 DNA 在 4℃条件下保存数月不影响检测结果。但口腔液或口鼻拭子样品在4~6h内检测，其影响不大，若运输时间过长，应添加唾液保护剂或干冰运输以保护核酸不被核酸酶破坏降解。

组织样品，如脾脏、淋巴结可于 50% 中性甘油溶液或含100μg/mL 青霉素和链霉素的 PBS 溶液中 4℃冷藏运送。到达实验室后立即存放于 -80℃以下。以上保存液均需充分灭菌后应用。

盛装送检材料的容器须确实密封，固定，置于装有冷却用品的容器中迅速送检。夏天运输耗时较长时，需更换冷却剂一次或数次。

活蜱样品在采集后应放于带螺纹塞、且有空气出入口的瓶或管中，样品瓶或管中放入潮湿的土或滤纸片。长期保存时，应放置于 20~25℃阴凉、潮湿环境下。为保持蜱体内 ASFV 的感染性，可以将带毒蜱存放于 -70℃以下。

无水乙醇也可以用于带毒蜱的保存，但是此种样品仅能用于 PCR 检测病毒核酸。

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