非洲猪瘟及其诊断技术

2.1.3 酶联免疫吸附试验

酶联免疫吸附试验（ELISA）的原理是将抗体或抗原吸附在固相载体表面，检测样品中的抗原或抗体可与其特异性结合，形成抗原抗体复合物，将酶标抗体再与该复合物结合，根据加入底物的颜色反应即可判定结果[28]。随着该技术不断发展与应用，其检测结果也更加准确而有效，具有方便、快速、设备仪器要求低、成本低等优点。但是与红细胞吸附实验相比，其灵敏性和特异性较低，检测结果受样本影响较大；与PCR相比，其特异性和灵敏性低，易出现假阳性；样本易受保存环境温度影响，检测结果准确性不能得到保证[24]。

2.1.4 荧光抗体试验

荧光抗体试验（FAT）是对病猪冰冻切片或者组织切片进行抗原检测。检测时，将病猪的冰冻切片、组织切片或已在载玻片上涂有已接种白细胞培养物的细胞沉淀干燥后，浸入丙酮中进行固定，用异硫氰酸荧光素标记抗非洲猪瘟病毒抗体，再用PBS 液冲洗后，在荧光显微镜观察，如果胞浆中发现特异性荧光，判为阳性。该实验具有很强的敏感性和特异性，可快速、简便地得到非洲猪瘟病毒检测的结果。但实验对荧光素特异性要求较高，非特异性荧光素染色可能会造成假阳性的结果，对急性非洲猪瘟的灵敏度高。同时该实验对操作人员的要求较高，并且需要借助显微镜，难以实现现场检测，常作为检测非洲猪瘟病毒的辅助方法[11,25]。

2.1.5 聚合酶链式反应

聚合酶链式反应（PCR），具有敏感、快速、特异性高的特点，同时对样品的纯度、血液样品及组织的保存方式要求较低，被广泛应用于非洲猪瘟病毒的检测。Agüero 等[29]根据p72 保守基因序列，设计引物，建立了快速检测ASFV 的PCR 方法，且该方法得到OIE 认证。但2015 年有相关研究认为，该方法在检测中会出现假阴性结果[30]。为解决这个问题，Luo等根据p72 基因设计引物，检测不同地区4 个基因型的14 个代表毒株，表明该方法更为灵敏、准确，能相对全面的检测非洲猪瘟病毒[31]。

2.1.6 多重PCR

此技术是在PCR 技术的基础上建立并发展起来的，能在同一个反应体系中，同时加入多对引物，分别扩增到不同的靶标，获得相应目的片段[32]。还能对DNA 和RNA 病毒进行同时检测，效率较高，降低了试剂耗材成本。如五重RT-PCR 鉴别诊断方法，广泛应用于动物疫病的检测[33]。

2.1.7 纳米PCR

该技术是将纳米金属颗粒添加到普通PCR 反应中，使反应体系热导性更强，PCR 反应更快，可提高反应的特异性，消除非特异性扩增，提高扩增产物产量，纳米PCR 技术可使非洲猪瘟病毒检测的灵敏度增加至1000 倍[34]。

2.1.8 套式PCR

套式PCR 是先用外套引物进行一次扩增，再用内套引物对扩增产物进行第二次扩增，提高扩增的敏感性，该方法可从非洲软蜱中检测出非洲猪瘟病毒，可用于筛查不同种类蜱体内的非洲猪瘟病毒[35]。

2.1.9 实时荧光定量PCR

实时荧光定量PCR 技术，是在PCR 体系中加入荧光基团，利用荧光信号实时监测PCR 反应过程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析[36]。该技术与常规PCR 相比较，检测过程简化，可对多个样品进行同时检测，检测的速度更快、灵敏度更高，并且特异性强、自动化程度高，有效解决常规PCR 污染等问题[37]。

2.1.10 等温扩增技术

等温扩增技术是核酸体外扩增技术，其始终维持在恒定温度进行反应。反应过程无需精密的仪器，具备恒温装备即可，并且操作简便，反应时间短。不足的是缺乏热循环中的变性、退火等程序，易出现假阳性，仅适用于疾病的初步筛查，在一定程度上限制了该技术的应用。且检测试剂盒中酶的成本较高，造成单个样品检测费用比普通荧光PCR 高[38]。

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