一类动物疫病实验室诊断技术应用现状与发展趋势

提升一类动物疫病的诊断效率、优化防控策略，关乎养殖业健康发展及公共卫生安全。本文通过梳理诊断技术的应用现状与发展趋势，可为一类动物疫病的高效诊断和有效防控提供依据，助力应对养殖业面临的疫病威胁及公共卫生安全挑战。

在全球畜牧业规模化、集约化进程不断加速的当下，一类动物疫病作为对动物与人类危害最为严重的疫病范畴，已然成为制约畜牧业稳健发展、威胁公共卫生安全的关键因素。

传统的实验室诊断技术，如病原分离培养、血清学检测等，在过去的疫病防控中发挥了重要作用，然而，面对当前一类动物疫病日益复杂的流行态势，如病毒的频繁变异、混合感染的增多等，这些传统技术在检测速度、灵敏度、特异性以及高通量检测能力等方面的局限性逐渐凸显，如传统的病原分离培养方法耗时较长，难以满足疫情紧急处置时快速诊断的需求；血清学检测方法易受疫苗免疫干扰，在疫病鉴别诊断中存在一定的困难。

近年来，随着生命科学、材料科学、信息技术等多学科的交叉融合，一系列新兴的实验室诊断技术应运而生，并在一类动物疫病的诊断中展现出巨大的应用潜力。

一、一类动物疫病实验室诊断技术的特点及应用

1、病原学检测技术

1）病毒分离鉴定。病毒分离鉴定是一类动物疫病诊断的经典方法之一，该方法将临床采集的怀疑感染样品接种于易感的细胞或动物体内，使病毒在其中增殖，然后对分离得到的毒株进行鉴定。如在非洲猪瘟诊断中，将样品接种于猪原代骨髓细胞、原代白细胞或肺泡巨噬细胞等进行培养，通过观察细胞病变效应等特征来判断病毒是否增殖，该方法在病原检测、流行病学溯源、生物学特性及致病性研究等方面发挥着关键作用，是确定病原体的“金标准”之一。然而，该方法操作复杂，需要专业的技术人员和特定的实验条件，检测周期长，一般需要数天甚至数周时间，且对样品的要求较高，容易受到污染等因素影响，限制了其在临床快速诊断中的应用。

2）红细胞吸附试验。红细胞吸附试验的核心原理是利用特定病原体感染宿主细胞后，病毒颗粒会吸附于细胞表面，进而与红细胞发生特异性结合，形成肉眼或显微镜下可见的“玫瑰花环”现象。以非洲猪瘟病毒检测为例，红细胞吸附性是其重要特征之一，发病猪的血液或组织悬液接种到相关细胞培养后，若存在非洲猪瘟病毒，病毒会黏附于猪的单核细胞或巨噬细胞表面，产生特征性的“玫瑰花环”现象，可在6天左右确定结果，通常样本呈强烈阳性时，24~48小时就会出现血液吸附现象，并分离出少量“非血吸附”的毒株。该方法需要进行原代细胞培养，时间周期长，目前已不再是检测的首选方法，多作为其他检测方法阳性结果确认的参考试验。

2、血清学检测技术

1）凝集试验。凝集试验是一类动物疫病血清学检测中的传统技术，包含虎红平板凝集试验、试管凝集试验、微量板凝集试验等。琥红平板凝集试验操作简便、成本低，适用于大面积检疫，但易受多种因素影响出现非特异性反应，阳性结果需进一步确诊；试管凝集试验敏感性较强，是布病诊断法定试验，但存在特异性差等问题；微量板凝集试验基于试管凝集试验发展而来，满足简捷、快速、高通量要求，灵敏度和特异性较高，适用于基层推广。如虎红平板凝集试验灵敏度高、价格便宜、操作方便，但受试验温度和凝集时间等影响，不易准确判定结果，且受操作人员主观判断影响较大，常作为筛选试验用于高危动物筛查及流行病学研究。它们在疫病初步筛查等场景有一定应用，但各自存在局限。

2）酶联免疫吸附试验（ELISA）。ELISA是目前应用最广泛的血清学检测方法之一，其基本原理是利用抗原与抗体的特异性结合，将抗原或抗体固定在固相载体表面，加入待检样品和酶标记的抗体或抗原，经过一系列洗涤和反应步骤后，通过酶催化底物显色来检测样品中是否存在相应的抗体或抗原。在一类动物疫病检测中，如口蹄疫、禽流感等的抗体检测，ELISA具有操作简便、可同时检测大量样品、结果相对快速、易于标准化等优点，适合实验室常规检测。在犬猫抗体检测中，ELISA可用于疫苗接种后抗体水平检测、疾病诊断、母源抗体检测和免疫监测等，但该方法也存在一些局限性，如容易出现非特异性反应导致假阳性结果，对于低水平抗体的检测灵敏度有限，且只能提供病原感染的间接证据，在疫苗普遍使用的情况下，难以准确区分感染动物和免疫动物。

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