荧光PCR的12种异常扩增曲线分析​

二、异常状态扩增曲线

1、扩增曲线抬升，与阈值线相交产生了CT值

图2 异常扩增曲线（1）

原因分析：

（1）软件在进行基线自动扣除的时候出现错误，引起了扩增曲线抬升。

（2）选用的耗材、试剂或者操作的原因导致背景荧光信号有所波动，造成反应孔的自动基线扣除错误。

（3）探针浓度过高，体系中有荧光物质污染，扩增效率低。

解决方案：

（1）采取手动调整基线的方法，重新定义基线即可正常（即将基线起点改为荧光信号稳定的循环数，基线终点设置成扩增曲线起峰的前一个循环数）。

（2）重新提取样本、重新配置试剂（可采用不同厂家试剂检测），注意人员操作。

（3）稀释模板重新扩增。

2、扩增曲线不平整，有向上或者向下的尖峰

图3 异常扩增曲线（2）

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