荧光PCR的12种异常扩增曲线分析​

原因分析：

（1）仪器不稳定导致的扩增曲线异常（也可能突然停电或者电压不稳）。

（2）尖峰向下，可能是卤素灯老化所致发射光源不稳定（指卤钨灯光源的激发器）。

（3）尖峰向上，考虑仪器或者孔位问题，还要考虑反应体系是否存有气泡。

解决方案：

（1）检查仪器性能，检查实验室电压情况。

（2）定期仪器保养维修，避免配件老化问题出现。

（3）检查问题孔位，排除孔位问题。

（4）配制反应体系，分装避免产生大量气泡。模板加完，反应管离心再扩增。

3、扩增曲线末尾起跳

图4 异常扩增曲线（3）

原因分析：

（1）阴性对照曲线末尾起跳，表示存在交叉污染。

（2）复检样本，排除非特异性扩增的可能性。

（3）正常样本曲线末尾起跳，怀疑模板存在交叉污染；或者样本浓度低、加样量不准确导致扩增效率低。

（4）所用的试剂设计不合理，或存在交叉污染, 或操作环境中有气溶胶造成污染。

解决方案：

（1）检查阴性对照，是否存在污染。

（2）复检样本。

（3）更换试剂，建议使用不同厂家试剂比对。

（4）对操作环境进行处理, 或更换新的环境、加样器、枪头以及所有的引物、试剂等。

首页前一页12345678后一页尾页