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荧光PCR的12种异常扩增曲线分析​

时间:2022-04-04    点击: 次    来源:猪病诊治    作者:佚名 - 小 + 大

原因分析:

(1)10个循环左右开始有抬高趋势,一般前15个循环的荧光信号作为荧光本底信号,此时反应体系和模板处于不稳定状态。

(2)基线自动扣除的时候出现错误,引起了扩增曲线抬升。

(3)反应体系不均一,干扰荧光信号采集。

12、扩增曲线先抬高再降低 (参考图)

图13 异常扩增曲线(12)

原因分析:

严重的蒸发会呈现先上升后下降的曲线,轻微的蒸发会是一种缓慢的上升,这类异常曲线可检查检测后的反应管液面是否有下降的现象来证明。

解决方案:

上机检测前检查反应管管盖是否完好,保证管盖和管口无缝隙后上机扩增。

三、总结

综上所述,在非洲猪瘟病毒核酸荧光PCR检测过程中,许多方面的因素都可干扰PCR扩增曲线,影响非洲猪瘟病毒核酸检测结果的判读。当我们遇到扩增曲线异常的情况,需要我们正确解读分析这些异常曲线,找出存在的问题及合理的解决方案,出具准确的核酸检测结果报告。

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