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非瘟抗体ELISA检测知识点

时间：2021-07-03 点击：次来源：中国兽医发布作者：原博士 - 小 + 大

实验流程通常为：

1）准备好包被了已知定量的抗原的ELISA板。

2）加样：加待检测的样品。温育反应一定时间，如果血清中含有针对包被抗原的抗体，则待检抗体与固相抗原发生特异性结合，形成固相抗原抗体复合物。洗涤除去未结合物质。

3）加竞争抗体：加入酶标单抗或多抗，该酶标单抗或多抗与待测样品竞争性与包被抗原结合，形成抗原—酶标抗体的复合物，温育，洗涤。

4）显色：加入底物溶液，温育一定时间后，固相上酶的催化底物产生有色产物，待检抗体越多，颜色越浅；待检抗体越少，颜色越深。

5）终止：加入终止液终止显色反应。

6）读数：使用酶标仪测定各孔光密度值（OD值）

3. 双抗原夹心ELISA

双抗原夹心ELISA用于测定血清中IgM、IgG、IgA等总抗体。技术难度最高，需要制备高质量的酶标抗原。该方法不受非特异性IgG的干扰，背景干扰小，敏感性和特异性高。

实验流程通常为：

1）准备好包被了已知定量的抗原的ELISA板。

3）加酶标抗原：加入酶标抗原，该酶标抗原与抗原抗体复合物结合形成抗原—待测抗体—酶标抗原的复合物，温育，洗涤。

4）显色：加入底物溶液，温育一定时间后，固相上酶的催化底物产生有色产物，待测样品中抗体含量越高，颜色越深。

5）终止：加入终止液终止显色反应。

6）读数：使用酶标仪测定各孔光密度值（OD值）。