非洲猪瘟荧光定量PCR检测常见假阳性结果分析

2. 选择性能良好的核酸提取仪和荧光定量PCR仪

大型的全自动化核酸提取仪设计时会引入分区设计、紫外防污染、层流防污染等措施，在选购核酸自动提取仪时应该考虑仪器的防污染性能。可以通过阴阳性样本交叉摆放，同时提取最大检测量的样本，来评估核酸提取仪的防污染性能。

关于荧光定量PCR仪的选择，某些仪器热盖设计存在严重缺陷，扩增结束后液体挥发严重，大量扩增产物泄漏，这种荧光定量PCR仪极易导致气溶胶污染。

3．选择带UNG酶防污染体系和内参的荧光定量PCR试剂盒

科学的试剂盒会引入UNG酶防污染体系，同时通过产品设计，保证PCR扩增效率。在降低气溶胶污染同时，保证检测的敏感性。

在荧光定量PCR扩增原料中不加TTP，只加UTP，扩增产物是含有UTP的核酸片段。UNG酶可以水解含有UTP的核酸片段，在扩增程序前添加UNG酶反应程序，可水解反应体系中含UTP的扩增产物，然后使用95℃高温灭活UNG酶，再运行荧光定量PCR反应程序，可以大幅度降低扩增产物气溶胶污染。

某些试剂盒附带的阳性对照浓度非常高（Ct值<25），频繁使用极易造成气溶胶污染。

使用带内参的荧光定量PCR试剂盒监控每个反应是否正常；使用弱阳性的样本（27<Ct值<35）作为阳性质控，监控提取和PCR反应的稳定性；尽量减少阳性对照的使用，可有效降低污染风险。

4. 荧光定量PCR应和普通PCR进行分区管理

某些检测中心针对相同的传染病检测，可能既开展荧光定量PCR检测，又开展普通PCR检测。如果普通PCR的扩增片段覆盖荧光定量PCR反应的扩增片段，则普通PCR的扩增产物极易污染荧光定量PCR检测系统。

5. 规范设计，改善PCR实验室环境

标准PCR实验室通常分为四个区（荧光定量PCR实验室无需产物分析区，分三个区），不同区域执行不同的实验操作（表1），中间品通过双扉传递窗单向传递。不同区域之间空气互相不流通，使用空调净化系统控制不同区域气压，形成压差，控制空气流向。每个区域设置缓冲间，缓冲间外部设置PCR实验室专用走廊（图1）。

表1 PCR实验室不同区域划分及功能特点