非洲猪瘟分子病原学及分子流行病学研究进展

6.2.2 天然致弱毒株

采用天然致弱A S F V毒株OURT88/3或NH/P68免疫动物后, 能诱导产生对同源强毒株的攻毒保护, 依据实验动物和攻毒毒株的不同, 保护率介于66%~100%[12-15]。研究表明, 病毒特异性抗体以及CD8+T细胞在免疫保护中均起重要作用, 且OURT88/3毒株产生的免疫保护与病毒特异性IFN-γ产生细胞呈正相关性。采用NH/P68免疫后, 猪对高毒力ASFV/L60感染抵抗力增强[13]。以OURT88/3免疫并用致病性OURT88/1毒株进行加强免疫后, 可诱导机体产生针对ASFV I型不同分离毒株的交叉保护[12], 表明研制具有交叉保护的ASFV疫苗是可能的。然而, 天然致弱毒株免疫动物后可造成诸多副反应, 包括肺炎、流产、死亡等, 免疫NH/P68毒株后25%~47%的猪呈现慢性感染[13];免疫OURT88/3后可导致发热、关节肿胀等症状[15]。总之, 天然致弱毒株导致的诸多副反应以及存在散毒的可能性等生物安全隐患限制了其在实际生产中的进一步应用。

6.2.3 重组致弱毒株

采用分子生物学方法, 敲除病毒功能基因、病毒毒力基因或者免疫抑制基因, 可降低病毒毒力或增加机体对病毒的免疫应答, 研制比传统弱毒疫苗安全性更好且效力更高的基因工程减毒活疫苗。研究表明, 一些ASFV毒株在缺失单个或多个毒力基因/或免疫抑制基因后, 如TK (K196R) 、9GL (B119L) 、CD2v (EP402R) 、DP148R、NL (DP71L) 、UK (DP96R) 和多基因家族360和505 (MGF 360/505) , 缺失毒株接种宿主毒力减弱且可诱导产生针对同源母本毒株或异源毒株的特异性免疫保护 (表1) [16-19]。ASFV编码多种蛋白以干扰宿主免疫系统, 已报道的病毒免疫逃逸相关基因包括A238L、A179L、A224L、DP71L、MGF360/505、I329L、K205R、D96R、DP148R、A276R、D96R和EP153R等, 其编码蛋白抑制宿主细胞Ⅰ型干扰素和ISGs的产生, 调控细胞凋亡、蛋白合成和自噬等多种信号通路[19-23]。由于这些蛋白质可干扰宿主免疫应答, 从ASFV强毒株中缺失上述基因有助于增强宿主免疫应答 (表1) 。

安全性和有效性是影响ASF弱毒活疫苗田间应用的重要因素, 安全性和有效性与病毒毒株、免疫或感染剂量、病毒接种途径以及接种动物密切相关。因此, 致弱毒株保护性的强弱、是否有毒力残留和是否导致持续感染是弱毒活毒株能否成为候选疫苗毒株的重要决定因素。因此, 还需要进一步研究以确定适合的缺失靶基因及其组合, 以研制可诱导保护性免疫反应且没有相应副作用的ASFV弱毒活疫苗。

表1 减毒活疫苗研究进展Table 1 Progress towards the development of ASFV live attenuated vaccines

6.3 病毒活载体疫苗

已有研究表明, 细胞免疫和体液免疫在抗ASFV感染中发挥作用[24-26]。有学者将ASFV保护性抗原重组入腺病毒或痘病毒载体, 以期获得更好的细胞免疫和CTL反应。Lokhandwala等[27]将ASFV p32、p54、p72和pp62基因分别重组入人腺病毒Ad5载体中进行“鸡尾酒”式免疫, 获得了良好的抗原特异性CTL反应;之后他们又将ASFV A151R、B119L、B602L、EP402RΔPRR、B438L和K205R-A104R共7个ASFV抗原基因, 重组入复制缺陷型腺病毒载体, 通过“鸡尾酒”式混合免疫后能够诱导强烈体液免疫反应和细胞免疫应答[28]。上述研究仍需通过攻毒保护试验, 进一步验证病毒活载体疫苗在ASF疫苗开发中的可行性。

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