猪断奶后多系统衰竭综合征诊断技术研究进展

在国内，PCR技术发展很快，许多学者相继建立了多种PCR方法用于猪圆环病毒分离鉴定或分子流行病学调查。王忠田、杨汉春等（2002）对北京、天津、广东、深圳、山东、山西等地12个规模化猪场疑似PCV-2感染猪群进行了临床发病情况调查，并采用PCR方法对收集的55份组织病料进行PCV-2检测，然后用限制性内切酶对PCR产物进行了酶切鉴定。结果表明，12个猪场中有11个猪场发病猪群表现为PMWS，1个猪场表现为猪皮炎和肾病综合征。该调查结果也证实PCV-2感染在我国规模化猪场已普遍存在。另外，梁红虎等（2004）采用PCR方法对发病仔猪的全血、血清、尿、粪便进行扩增，结果发现，全血的PCR阳性率最高（6/7，85.7%），粪便的阳性率最低（2/7，28.6%）。由此可见，PCR的扩增阳性率与病料的选择有着非常密切的关系。余旭平等（2003）采用复合PCR方法对浙江、上海等地的猪场具有明显“高热综合征”临床表现的猪淋巴结进行检测，，发现PCV-2的阳性率为39.40%，而PCV-1的阳性率为33.33%，并怀疑2001年入夏前后在浙江省和周边地区大面积爆发的“猪高热综合征”可能与PCV-2的感染具有一定的相关性。

4 限制性片段长度多态性分析（RFLP）

Fenaux等（2000）先以PCR快速而有效的扩增微量的猪圆环病毒DNA，再利用RELP区分PCV-1和PCV-2 ，以此来进行猪圆环病毒的检测和定型。他们根据PCV-1和PCV-2的243bp的片段，利用仅在PCV-2上有的限制性酶切片段位点Nco I来鉴定PCV-1和PCV-2。PCV-2的PCR产物可被Nco I切成168bp和75bp的两个片段，而PCV-1的PCR产物上无Nco I的位点，所以不能被Nco I切割，这样就可以直接区分PCV-1和PCV-2。吕艳丽等（2002）采用PCR方法从猪的淋巴结和脾脏中扩增出了预期长度的PCV-2 DNA片段，再用限制性内切酶Eco R酶切鉴定了PCV-2 PCR产物的特异性。

5 免疫组化试验（IHC）和原位杂交试验（ISH）

免疫组化技术（IHC）适合于病毒抗原在组织培养和机体细胞内生长定位的观察。Sorden等将纯化PCV-2与佐剂混合免疫大白兔，获得了PCV-2高免血清。利用该高免血清与包埋组织中的PCV抗原结合，在采用生物素标记的抗抗体与血清结合，最后用过氧化物酶标记的链霉素染色。这种借助生物素-链霉素-酶复合物的生物放大系统，可以将抗原抗体结合位点的信号进行多级放大，进一步提高了检测的灵敏度。他们通过此方法发现在阳性细胞的胞浆内存在大量浓染的直径0.5-3um的圆形病毒包涵体。Segales等（1997）建立了原位杂交试验（ISH），用猪圆环病毒特异性探针检测猪病变部位的核酸，可在淋巴结、肺脏等病变组织的一些炎性细胞中观察到明显的标记，呈现深褐色的反应。国内目前有关IHC和ISH的报道甚少。

6 免疫荧光技术

免疫荧光技术常用于猪圆环病毒感染的血清学普查，快速、特异、敏感，缺点是不能区分PCV-1和PCV-2产生的抗体。周继勇、陈庆新等（2004）报道，应用间接免疫荧光技术，测定了浙江地区44个猪场2000-2002年间的2039个血清样本，对不同年龄和品种猪的血清学数据进行了系统分析。结果显示，浙江地区44个猪场均有猪圆环病毒感染，猪的平均阳性率为58.31%，其中种猪感染的血清阳性率为59.38%，断奶后猪感染的血清阳性率为56.65%。品种方面，长白种猪感染的血清阳性率为44.83%、长白仔猪感染的血清阳性率为64.28%，明显高于大约克和杜洛克种猪和仔猪的感染率。PCV-2感染的血清阳性率高的种猪和仔猪群，其PRRSV和伪狂犬病毒（PRV）的抗体阳性率较低，这种现象表明，PCV-2感染可能会引起免疫抑制。芦银华等（2002）应用间接荧光技术对几个地区的64份临床血样进行检测，结果38份血清呈现PCV抗体阳性（59%），表明PCV已在我国普遍流行。

7 酶联免疫吸附试验（ELISA）

Nawagitgul等分别采用PK-15细胞增殖的病毒粒子和昆虫细胞表达的PCV ORF2特异性衣壳蛋白作为抗原建立了间接ELISA。用该法对人工感染PCV实验猪进行血清学抗体检测，发现以PCV2病毒粒子和ORF2作为抗原的ELISA的敏感性、特异性和准确性相似，接种后14-21天即可检测出PCV抗体，抗体含量逐步增加。但与间接免疫荧光试验相比，ELISA简捷、快速，而且一次可以检测大量样品，非常适合用于血清学调查，但其敏感性略低于免疫荧光技术。国内崔尚金等采用PCV病毒抗原和正常细胞对照抗原，建立了间接ELISA，并被农业部推荐进行流行病学调查。

小结

PMWS的流行仅短短数年，已经给世界各地的养猪业造成了巨大经济损失。目前，本病的诊断和免疫机理是研究的热点。国内外已经有许多学者相继建立多种PMWS诊断方法，但离商品化试剂盒尚有很大差距，需要进一步修正和规范。相信随着本病研究的不断深入，将有越来越多的机理被揭示，必将为本病的防治提供理论依据。

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