七类消毒剂对非瘟病毒荧光定量PCR检测结果的影响

结果（表 2）显示，本研究中不同滴度 ASFV与戊二醛类消毒剂作用后，荧光定量 PCR 检测 Ct值均显著上升。与阳性对照组相比，戊二醛类 A1产品 1:80~1:200 稀释下，当病毒滴度为 105.2~103.2HAD50/mL 时，检测 Ct 值上升约 3.19~4.15；当病毒滴度为 102.2 HAD50/mL 时，未检测到 Ct 值。A2产品在 1:80~1:200 稀释灭活不同滴度病毒后，检 Ct 值上升 1.21~4.33。

酚类B产品与不同滴度病毒作用后检测发现，与对应阳性对照组测定 Ct 值基本相当，仅个别检测结果出现 Ct 值波动（如 1:200 工作浓度下灭活102.2 HAD50/mL 病毒时），总体看酚类 B 产品灭活病毒后对荧光定量 PCR 检测结果影响不大。

含碘类 C1 产品，当灭活病毒滴度为 105.2~104.2HAD50/mL 时，检测 Ct 值变化不显著；当灭活病毒滴度为 103.2~102.2 HAD50/mL 时，检测 Ct 值显著上升 3.45~5.76。C2 产品与不同滴度病毒作用后检测发现，当灭活病毒滴度为103.2~105.2 HAD50/mL时，比对应阳性对照组测定Ct值稍有上升（0.46~1.06）；仅灭活病毒滴度为 102.2 HAD50/mL 时，2.00% 稀释度下检测结果 Ct 值明显上升（约 2.46）。

季铵盐类 D 产品与不同滴度病毒作用后检测发现，与对应阳性对照组测定 Ct 值基本相当，基本无显著差异。含氯类 E 产品与不同滴度病毒作用后检测，均未检测到 Ct 值。

过硫酸氢钾类 F 产品，当灭活病毒滴度为105.2 HAD50/mL 时，检测 Ct 值上升约 1.68；当灭活病毒浓度为 104.2~102.2 HAD50/mL 时，均未检测到 Ct 值。

二氧化氯类 G 产 品， 当灭活病毒滴度为 105.2~104.2 HAD50/mL 时， 检测 Ct 值上升5.17~7.52；当灭活病毒滴度为 103.2~102.2 HAD50/mL时，均未检测到 Ct 值。

3　讨论

ASFV 属于囊膜 DNA 病毒，对环境抵抗力强，但对戊二醛、含氯、含碘类等多数常用种类消毒剂敏感。现场消毒后，常需对消毒效果进行监测评价，以防止由于消毒不彻底造成 ASFV 传播扩散。目前，采用病毒分离方法只能在农业农村部指定实验室中开展，且技术难度大、检测周期长，而检测抗原的 ELISA 或胶体金等免疫学检测方法敏感性达不到消毒效果评价要求。分子生物学方法特别是荧光定量 PCR 方法，具有简便、快速、高通量等优势，是实践中 ASFV 病原检测最主要手段，且适用于唾液、血液、组织、环境拭子等多种样品类型，可广泛应用于养殖场、屠宰场、无害化处理厂、运输车辆等多种场景消毒效果评估。

结果显示，与其他几种消毒剂相比，含氯类（二氯异氰尿酸钠）、过硫酸氢钾类、二氧化氯类 3 类消毒剂，消毒后对荧光定量 PCR 检测结果影响最显著，检测 Ct 值明显上升或未检测到，且其影响能力排序为：含氯类（二氯异氰尿酸钠）＞过硫酸氢钾类＞二氧化氯类。含氯类消毒剂（二氯异氰脲酸钠）遇水后可释放出次氯酸，可导致病原蛋白质变性、改变膜通透性并可直接影响 DNA 合成等来杀灭病原。本研究中含氧类消毒剂与滴度≤ 105.2 HAD50/mL 病毒作用后检测，均未见 Ct值。当前市售过硫酸氢钾类消毒剂，多由过硫酸氢钾、表面活性剂、无机盐与有机酸等组成，其消毒原理：一是利用过硫酸氢根的强氧化能力，在水溶液中产生羟基自由基等改变微生物细胞膜的通透性使之破裂；二是使用时过氧离子能将氯离子氧化为次氯酸，达到杀灭病原目的。本研究中过硫酸氢钾类消毒剂与滴度为 105.2 HAD50/mL 病毒作用后检测时 Ct 值上升，与≤ 104.2 HAD50/mL 病毒作用后检测未见 Ct 值。二氧化氯类消毒剂是一类强氧化剂，并兼具含氯类消毒剂作用机制，可与细胞内部酶发生氧化反应，还可氧化分解氨基酸、核酸等，使微生物蛋白质的合成被抑制并导致蛋白质功能丧失。本研究中当二氧化氯类消毒剂与滴度104.2~105.2 HAD50/mL 病毒作用后检测 Ct 值上升，与≤ 103.2 HAD50/mL 病毒作用后检测均未见 Ct 值，可推断其核酸降解能力弱于前两者。

戊二醛类消毒剂，主要通过凝固病原微生物蛋白质中的氨基、羧基，破坏病原微生物蛋白分子使其死亡，在本研究中戊二醛类消毒剂显示较弱的核酸降解能力。A1 产品仅当与滴度≤ 102.2HAD50/mL病毒作用后检测未见Ct值。A1、A2相比，当灭活病毒滴度为 102.2 HAD50/mL 时，A2 仍可检测到 Ct 值而 A1 未检测到，表明 A1 对检测 Ct 值影响大于 A2，推测可能与 A1 具有更高戊二醛工作浓度有关。

含碘类消毒剂消毒时，游离状态的碘原子产生强氧化作用，主要破坏病原体的细胞膜结构及蛋白质分子，并可部分作用于核酸。本研究中显示含碘类消毒剂具有较弱的核酸降解能力，C1 仅当与滴度为 103.2~102.2 HAD50/mL 病毒作用后，检测Ct 值出现上升。

本研究中的酚类和季铵盐类消毒剂，消毒后与对应阳性对照组测定 Ct 值基本相当。酚类属于原生质毒物，可穿透破坏细胞膜、沉淀蛋白质；季铵化合物是一种膜活性剂，可损伤、破坏细胞膜，导致细胞质电位和 pH 梯度变化，两者在消毒原理上对核酸作用小。

采用荧光定量 PCR 检测评估对 ASFV 的消毒效果时，未检测到 Ct 值的原因：一方面是消毒剂本身即具有核酸降解能力，另一方面是消毒前后进行的清洁、清洗也会清除 ASFV 核酸。由于荧光PCR 方法原理是对病毒核酸检测，现场检测时若结果阳性，仅表示存在 ASFV 核酸，并不能说明病毒本身是否存活，是否达到有效灭活效果还应根据现场条件以及使用消毒剂种类、使用浓度、作用时间等因素综合分析。此外，也可考虑采用指示微生物方式进行辅助的消毒效果验证。综上，本研究评估了 7 类 9 种常用消毒剂灭活 ASFV 后，对荧光定量 PCR 检测结果的影响，可为 ASFV 消毒效果评价提供技术参考。

首页前一页123后一页尾页