一类动物疫病实验室诊断技术应用现状与发展趋势

3）免疫荧光技术。免疫荧光技术用荧光素标记抗体，与待检样品中的抗原结合，在荧光显微镜下观察，若存在特异性荧光，则表明样品中存在相应抗原。该技术具有高灵敏度和特异性，检测结果直观，可直接观察到抗原在组织或细胞中的分布情况，常用于病毒、细菌等病原体的检测，如对感染口蹄疫病毒的动物组织进行检测。不过，免疫荧光技术需要荧光显微镜等特殊设备，操作相对复杂，对技术人员要求较高，检测成本相对较高，在一定程度上限制了其广泛应用。

3、分子生物学检测技术

1）聚合酶链式反应（PCR）。PCR技术是一类动物疫病分子诊断的核心技术之一，其原理是在体外模拟DNA复制过程，通过设计特异性引物，以样品中的核酸为模板，在DNA聚合酶的作用下，经过高温变性、低温退火和适温延伸等循环步骤，使目的核酸片段得到指数级扩增，扩增产物可通过琼脂糖凝胶电泳等方法进行检测，若出现特异性条带，则表明样品中存在相应病原体的核酸。PCR技术具有灵敏度高、特异性强、快速等优点，能够检测出极微量的病原体核酸，可用于多种一类动物疫病的早期诊断，如非洲猪瘟、高致病性禽流感等；但PCR技术也存在一些缺点，如对实验环境和仪器设备要求较高，操作过程中容易出现交叉污染导致假阳性结果，且对样品的质量要求严格，若样品中存在抑制剂可能导致假阴性结果。在猪流行性腹泻病毒检测中，可通过RT-PCR检测粪便样品，经提取核酸、扩增等步骤判断是否存在病毒。

2）实时荧光定量PCR（qPCR）。qPCR是在PCR技术基础上发展起来的一种核酸定量检测技术。该技术在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号的变化实时监测PCR扩增过程，通过标准曲线对样品中的核酸进行定量分析。在一类动物疫病检测中，qPCR不仅能够快速准确地检测病原体核酸的存在，还能对病原体的载量进行定量，有助于评估疫情的严重程度和治疗效果，如在禽流感病毒检测中，可通过qPCR定量检测病毒核酸含量，判断病毒在动物体内的复制情况；qPCR具有灵敏度高、特异性强、自动化程度高、检测速度快等优点，可有效避免PCR扩增后开盖检测带来的交叉污染问题，但仪器设备价格昂贵，检测成本相对较高。

二、面临挑战

1、病原体变异

一类动物疫病病原体如病毒、细菌等容易发生变异，导致其抗原性、致病性等发生改变，这使得传统的诊断技术难以准确检测和鉴定变异后的病原体，增加了诊断的难度，以禽流感病毒为例，它是RNA病毒，缺乏RNA聚合酶的校对功能，再加上免疫原性选择和基因片段的频繁重排，使得其进化速度极快，这些变异导致病毒的抗原性、致病性发生改变，让传统诊断技术难以招架。针对流感病毒不同检测方法的灵敏度进行分析，结果显示HA-TC的灵敏度显著下降，RIA的灵敏度也降低了。这充分说明，病毒变异对诊断试剂的灵敏度和特异性影响巨大，很容易造成漏检或误诊的情况。

2、检测技术的局限性

不同的诊断技术都存在一定的局限性，如病原学检测技术虽然准确性高，但操作复杂、周期长，在病原学检测技术中，传统的病毒分离鉴定方法耗时久，病毒在畜禽中的传播速度较快，而传统实验室检测至少需要24小时才能得出结果。若检测不及时，畜禽死亡率可能从正常情况下的10%急剧上升至50%以上，给养殖业带来巨大损失；血清学检测技术易受疫苗免疫等因素干扰，且只能提供间接证据；分子生物学检测技术对实验条件和操作人员要求较高，容易出现假阳性或假阴性结果，此外，现有的检测技术在检测通量、自动化程度等方面还不能完全满足大规模疫病监测和快速诊断的需求。

3、检测成本与基层应用

一些先进的诊断技术如高通量测序、数字PCR等虽然具有高灵敏度和高准确性，但仪器设备昂贵，检测试剂成本高，难以在基层实验室推广应用，以数字PCR技术检测为例，单次检测成本约为300~500元。对于一个年出栏5万只畜禽的养殖场来说，若按照定期检测的标准，每年仅检测成本就将达到数万元。一旦遭遇疫情暴发，检测支出可能占养殖总成本的15%以上，这对于利润微薄的养殖户而言难以承受。此外，基层技术人员专业素质参差不齐，基层实验室在动物疫病防控中承担着重要的疫情监测和初筛任务，检测技术和设备的不足限制了其防控能力的发挥，同时，基层技术人员的专业素质和技术水平相对较低，也影响了先进诊断技术的应用效果。

首页前一页123后一页尾页