非洲猪瘟病毒基因分型与血清分群研究进展

6 其他基因分型

除常利用P72基因、IGR位置、9RL/B602L基因和P54基因进行基因分型外，为更好地探讨毒株之间的进化差异，特别是同一个区域内毒株的进化趋势，研究者还对P30（CP204L）、CD2v（EP402R）、TK（thymidine kinase）以及J268L、Bt/Sj、KP86R、O174L、C315R/C147L、K145R和MGF 505-5R等基因进行比对分析。Nix等对J268L、Bt/Sj和KP86R基因进行序列分析，结果发现不同分离株的基因长度和序列有部分差异，可以用于区分进化相近的分离株。Sanna等利用P30（CP204L）基因、IGR位置和EP402R基因对意大利撒丁岛流行多年的ASFV进行了基因分析，结果发现P30基因和IGR位置高度稳定，而EP402R基因却可以将毒株划分为2个分支——第一个分支为1978—1990年流行毒株，第二个分支为1990—2014年流行毒株，这提示ASFV流行株可能在不断提升的疫病控制和诊断技术水平下，受到选择压力的影响发生部分变异。2017年，Onzere等首次利用TK基因对ASFV流行株进行分析，结果发现2011—2013年的肯尼亚分离株与南非参考毒株有明显差异。2019年，Mazur-Panasiuk等通过全基因测序在波兰分离株中发现K145R和MGF 505-5R等基因中出现单个核酸序列改变导致的蛋白序列改变（single nucleotide polymorphism，SNP）。随后，通过对O174L基因、K145R基因和IGR位置进行同时测序和组合比对，将波兰毒株分为4个遗传进化群。这些研究提示，将上述“分子指纹”（molecular fingerprints）基因进行组合分析，可更深入地了解同一区域内毒株的流行演变规律。

7 血清分群研究

1963年，通过红细胞吸附抑制（hemadsorption inhibition，HAI/HADI）试验和感染猪交叉保护试验，科学家首次用试验数据证实ASFV存在抗原差异。随后对多株ASFV进行的HAI显示，ASFV之间的抗原差异可将ASFV进行分类或分型，并将具有血凝性的ASFV分为A、B和C共3个亚型。但这种分型方式没有继续使用下去，可能原因是HAI试验需要活病毒和恢复期血清，而ASFV的高致死率无法持续获得血清转化的存活家猪，且针对HAI的抗体产生时间较晚，滴度较低。因此，探索HAI血清分群机理，查找HAI血清分群抗原决定簇显得尤为必要。经过众多研究者的不断努力，最终证实CD2v（EP402R）和EP153R（C-type lectin）基因与ASFV的HAI紧密相关，且该区域为ASFV基因组序列中变异较大的区间。随后，俄罗斯VNIIVViM研究所进行了更深入长久的研究，并最终基于CD2v和C-type lectin蛋白编码基因的特定区域序列比对，将ASFV划分为至少8个血清群。经与P72基因分型比较，Malogolovkin等发现：P72基因分型与基于CD2v和C-type lectin的血清分群在相对有限区域内（如南非地区的分离株）差异较大；相反，在一些只有单一基因型疫情暴发的非疫源地国家，分离毒株的基因分型和血清分群无显著差异；同时，同一个基因型内也可能包括多个血清群，如血清I型、II型、IV型都可被划分到基因I型中，说明欧洲大陆分离的ASFV毒株有多种来源背景。以上结果进一步说明，在某些情况下，标准的P72基因分型可能无法有效区分相似来源背景的ASFV毒株。

8 结语

ASFV基因分型与血清分群都是基于特定的基因序列比对分析所得，目前通过常规PCR扩增和核苷酸测序比对分析可以很快确定ASFV基因分型与血清分群。ASFV基因组较大，所以ASFV在不同细胞系、宿主体内（特别是在野猪和软蜱）复制传代时，容易造成基因组末端可变区和中央可变区发生序列插入和缺失。而P72基因相对保守，所以当只有一个毒株在一定区域内流行时，一般不会发生基因型变化，因此P72基因分型是国际最通用、快速、方便的分型方法，并且仍是病毒新传入某区域后进行鉴别诊断的首选方法。其他基因分型及血清群分析，因这些基因变异性相对更强，故可有助于分析ASFV分子流行病学变化和预判毒力演变。研究ASFV基因分型可以有助于从分子水平追溯引发疫情的病毒来源，掌握潜在的传播途径及可能的传播方式。

目前非洲流行的ASFV包含所有的24个基因型，且主要分布在东非和南非。中非主要流行基因I型和II型，西非部分国家主要流行基因I型，而北非尚无疫情报道。20世纪60年代在西欧国家流行的毒株主要是基因I型，2007年传入格鲁吉亚并扩散到俄罗斯、东欧诸国的毒株是基因II型、血清8群。我国ASFV流行株和亚洲流行株也是基因II型、血清8群。因此，研究ASFV基因分型和血清分型有助于从分子水平追溯引发疫情的病毒来源，掌握潜在的传播途径及可能的传播方式，对于该病的流行病学分析具有重要意义。

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