非洲猪瘟病毒基因分型与血清分群研究进展

摘要：非洲猪瘟（African swine fever，ASF）具有高传染性和致病性，给养猪业造成巨大经济损失。研究非洲猪瘟病毒（African swine fever virus，ASFV）基因分型有助于从分子水平追溯引发疫情的病毒来源，掌握潜在的传播途径及可能的传播方式。随着ASFV分型技术的不断演变，ASFV基因组遗传演变研究不断深入。截至目前，ASFV已被划分成24个基因型或8个血清群。本文综述了ASFV P72（B646L）基因分型、IGR分型、9RL/B602L基因分型、P54（E183L）基因分型等的研究历程，特别是最新的IGR分型研究。研究显示：P72基因相对保守，因此P72基因分型是国际最通用、快速、方便的分型方法，并且是新传入地域进行鉴别诊断的首选方法；其他基因分型及血清群分析，可有助于预判ASFV分子流行病学变化和毒力演变。本研究可为我国ASFV诊断技术及遗传演变研究提供参考。

非洲猪瘟病毒（African swine fever virus，ASFV）基因组为线状双链DNA，整个基因组长度为170~193 kb，包括左侧可变区（left variable regions，LVR）38~48 kb，中央保守区（central conserved region，C区）约125 kb和右侧可变区（rightvariableregion，RVR）13~22 kb。不同毒株的基因组序列可能会在LVR内的多基因家族（mltigene family，MGF）、C区内的中央可变区（central variable region，CVR）和EP402R基因（表达CD2v蛋白）等位置存在显著差异。这些可变区为ASFV的进化分析特别是遗传演变研究提供了有力条件。但是我国针对该领域还无专业阐述，没有全面展示ASFV基因分型和血清分群的研究进展，为此就相关研究进展进行综述，以期为我国ASFV诊断技术及遗传演变研究提供参考。

1 基因分型研究

在非洲猪瘟（African swine fever，ASF）早期研究中，科研工作者借助红细胞吸附试验（hemadsorption reaction）、琼脂扩散沉淀试验（agar diffusion precipitin test）、补体结合试验（complement-fixation test）和等电沉淀技术（isoelectric precipitation）等诸多技术，逐渐认识到ASFV存在抗原多样性。随后，利用限制性片段长度多态性（restriction fragment length polymorphism，RFLP）分析，将ASFV分为I、II、III和IV共4个主要群（1984年）或I—V共5个组（1989年），并提出以此方法进行病毒分型应以基因组的中间位置为目标区域。另有报道利用RFLP对软蜱中分离的ASFV进行了分型研究；但是RFLP技术无法快速进行病毒来源追溯，使得利用该技术进行ASFV分型的研究停滞不前。伴随着基因克隆技术、PCR技术和测序技术的快速发展，ASFV的基因组研究也在不断深入。继1984年首次成功构建含有98%基因组信息的文库之后，ASFV基因组文库构建的研究逐渐增多，这为后期的基因测序及分析打下了基础。

2 P72（B646L）基因分型

1990年，Lopez-Otin等对P72蛋白编码基因全长进行了测序分析，为研究P72蛋白编码基因作为诊断基因奠定了基础（P为结构蛋白英文缩写，72指蛋白相对分子质量103的数字部分）。1992年，Steiger等首次利用PCR技术建立了ASF快速诊断技术。1996年，Yu等对4株分离自不同地区的ASFV P72基因核酸及编码蛋白序列进行比对，发现P72基因序列高度一致（97.8%~100%），该结果与之前研究发表的P72蛋白抗原稳定的结论相符，由此进一步奠定了P72基因作为抗原分型理想基因的重要地位。

2001年，Gonzague等利用P72基因部分片段证明了1999年分离的ASFV马达加斯加毒株与1994年分离的莫桑比克毒株序列最接近。2003年，Bastos等利用P72蛋白C端末端（位置为498~635）序列，首次将ASFV划分为10个基因型。通过与RFLP方法比较，该研究证实在P72基因序列水平上，不同ASFV毒株之间的遗传变异率可达9.4%，说明该方法适宜进行分子流行病学分析且可以更好地区分暴发时间和地理分布相近的非洲东部或南部毒株。2005年，Lubisi等进一步将ASFV划分为16个基因型，并首次从东非境内的森林循环宿主（软蜱或野猪）中发现基因I型毒株。2007年，Boshoff等对南非1973—1999年分离的43株ASFV进行比对分析，发现了6个新分支。至此，ASFV被划分为22个基因型。

此后，ASFV的进化分析主要以此为基础，利用P72基因进行ASFV基因分型的研究逐渐增多并成为最重要的分型标准。2016年，Achenbach等对2011—2014年埃塞俄比亚分离的ASFV进行P72基因进化分析，发现了第23个基因型。该基因型与流行于非洲东部国家和刚果民主共和国的IX和X基因型来源于同一个进化分支。2017年，Quembo等在莫桑比克戈龙戈萨国家森林公园采集的软蜱样品中分离到19株ASFV，经进化树分析发现，其中5株病毒属于新的进化分支，因此被命名为第24个基因型。基于P72基因分型已被广泛使用，所以通常所说的ASFV基因型就是指P72基因分型。

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