猪病检测标准采样流程及注意事项

一、 病原检测采样的原则及要点

1、当前病原体检测的主要方法：

1.1 病毒性病原：PCR、RT-PCR、qPCR、qRT-PCR 、LAMP、NASBA

1.2 细菌性病原：接种分离培养、PCR

1.3 寄生虫病原：镜检、PCR

2、检测项目的选择：

检测项目应根据猪场当地疫病流行情况、临床表现和病理剖检的初步诊断来确定。

2.1 全身性疫病：猪瘟、蓝耳、圆环、伪狂、细菌、弓形体、附红体等

2.2 呼吸系统病：蓝耳、流感、伪狂犬、支原体、细菌等

2.3 消化系统病：流行性腹泻、传染性胃肠炎、轮状病毒、黄白痢、增生性回肠炎、副伤寒、寄生虫等。

2.4 繁殖障碍病：猪瘟、蓝耳、伪狂、乙脑、细小、衣原体等。

3、采样一般原则

3.1 先排除、后取样：背景信息、非传染病因素、可能的病因；

3.2 尽“早” 采样：关注疫病的病程，采样时机合理：

3.2.1 分离时机：现时对很多病原在动物体内的消长规律还缺乏透彻的了解，尤其是蓝耳、流感病毒出现“病毒血症”的时机相当微妙，如果没有对发病动物作及时细致的跟踪观察，而只是随机性抽取血样，很难捕获目标。

3.2.2 药物干扰：临床经验表明，对病猪作抗生素、化学药物处理以及疫苗接种等措施都有可能影响病原分离结果。因此，对临床样品处理方法可能应有别于实验动物。

3.3 采样种类要齐全：“全”与“准”；

3.4 生物安全：避免因采样造成疫病扩散，后续处理得当；

3.5 样品背景信息要完整：日龄、免疫程序、用药情况、发病情况、剖检情况、拍照。

4、样品采集

4.1 采样对象：在养猪生产实际中，当猪群出现疫病时，一般都会首先进行治疗，在常规防治措施不能控制疫病蔓延时，才会采样送检。这时最初病猪的病程可能已有1－2周，如果从有一定病程或经过治疗猪采样，往往检测到的是继发病原。应选取发病早期并未经过治疗的猪只进行采样，必要时选取小量新发病猪有意不进行药物治疗，促使典型病变出现。

5、采样时间

5.1 病原检测采样：取样时间要求在病猪死后即行采取,最好不超过2小时。剖开腹腔后,首先取材料,再作检查。

5.2 注意事项：肠道样品需在肠管两端进行打结，且需单独保存；关节样品、皮肤、肌肉等样品，可送检整个组织或部分机体；细菌类样品，尽量抗生物治疗前取样，避免冷冻，应保持冷藏温度（2-8℃）尽快送检。

6、采样部位：不同病原均有不同的主要侵害器管和喜好的繁殖组织，不同病程也有其不同的主害部位，采集检测病料应选择病原含量较高的器管或组织，减少漏检率。

7、采样准备：

动物剖检工具：手术刀(刀片、刀柄)、手术锯、骨剪；

样品采集工具：注射器、载玻片、无菌棉拭子、手术剪、止血钳、无齿镊；

样品收集工具：离心管、(注射器)、标本袋(自封袋)、病理固定袋；

防护工具：手套、口罩、帽子、防护服；

其他：冰袋、冷藏箱、记号笔、铅笔等。

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