非洲猪瘟病毒核酸定性检测方法比对

1.3.5　检测过程质量控制　每个反应设置阳性、阴性及空白对照。其中 SN/T 1559—2010 标准中引物扩增的阳性对照使用对应序列合成的质粒DNA，阴性对照为不含目标基因的 DNA，空白对照用无菌水代替。按标准和试剂盒说明书进行结果判定。

2　结果

2.1　普通 PCR 检测

PCR 扩增、琼脂糖凝胶电泳检测结果（图 1）显示：除阳性对照外，有４个样品（20、69、73、86 号）PCR 结果呈阳性，阳性样品与阳性对照一致，均扩增得到 278 bp 的特异性条带，其中 69 和73 号样品扩增强度较弱；15 号样品无扩增片段，检测结果为阴性。

图 1　普通 PCR 电泳图

2.2　荧光 PCR 检测

荧光定量 PCR 扩增结果（图 2）显示，除阳性对照外，4 个样品荧光 PCR 检测结果呈阳性，其中 20、86 号样品扩增信号较强，Ct 值分别为22.8 和 21.4；69、73 号样品扩增信号较弱，Ct 值分别为33.8和34.0。15号样品无扩增信号，无Ct值，结果判定为阴性。

图2　荧光 PCR 扩增曲线

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