PCR检测实验室的核酸污染的预防和处理

6.PCR产物的处理

有一些规范建议PCR产物使用1mol/L盐酸浸泡，我认为这极易造成PCR产物的暴露和扩散，具有很高的风险。还有一些实验室从生物安全的角度将所有的实验废弃物全部高压，我也是不建议的，因为PCR产物没有生物安全风险，高压会造成PCR产物扩散，对实验室的污染风险更高。个人建议对于PCR产物，进行表面消毒后按照普通医疗废弃物处理即可。

7.检测方法的选择

对于一般的核酸检测实验室，推荐使用封闭扩增的荧光定量PCR方法进行核酸检测。不推荐使用普通PCR方法和巢氏PCR，使用这两种方法实验室污染是大概率事件。谨慎使用等温扩增的方法，等温扩增的酶反应效率更高，产物中模板含量也更高，污染的概率也会提高。

8.实验操作

操作核酸时动作要轻柔，移液器吸液慢吸慢放，开管盖要慢慢开，避免操作产生气溶胶。使用涡动混匀后，稍稍静置一会再开管盖，推荐使用移液器缓慢吹吸混匀。

9.含尿嘧啶糖苷酶（UNG）试剂的使用

其原理是用dUTP 代替dTTP，使产物中掺入大量dU。在再次进行PCR 扩增前，用UNG 处理PCR 混合液即可消除PCR 产物的残留污染。由于UNG 在PCR 循环中的变性一步便可被灭活，因此不会影响含dU 的新的PCR 产物。

10.试剂耗材要求

所有试验物品尽可能分装成小包装：耗材开包后分装成一周使用量，用自封袋封好。试剂也尽可能购买小包装或者回实验室分装，实验中经常用到配液的水尤其需要分装。实验中所有吸头都应使用带滤芯的吸头。

二、核酸污染的处理措施

发现污染第一步就是要暂停实验，评估假阳性对以往检测结果的影响。对实验进行彻底打扫和清理，尽可能更换相关的试剂耗材，对仪器设备进行清洁和去核酸处理。所有人员回家洗澡换衣服。

1.化学处理法

使用商品化的DNA去除剂，有好用的DNA去除剂大家可以推荐给我。

2.物理处理法

使用紫外灯照射。

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