2013—2018年我国H9亚型禽流感分子流行病学监测

2.2 HA 基因遗传进化分析

从 GenBank 中选取 5 个 H9 亚型代表毒株及11个我国普遍使用疫苗毒株的 HA 基因序列（表1），与分离的 80 株毒株 HA 基因进行对比和遗传进化树分析（图 1）。从图中可看出 2013—2018 年分离到的 H9 亚型 AIV 大部分在 H9.4.2.5 分支上，只有2013 年云南的 A-CK-yunnan-2013 在 H9.4.2.6 分支上。H9.4.2.5 分支又有许多小分支，其中：79 个分离株在 Y4 亚群，与 Y4 疫苗株的核苷酸同源性在93.7% 以内；60 个分离株在 WJ57 亚群，与 WJ57疫苗株核苷酸同源性在 95.5% 以内。遗传进化树分析显示：2013—2018 年的分离毒株在遗传进化树上基本按时间顺序排列，而且随着时间推移，新分离毒株逐渐远离疫苗毒株。

表1　选用的 H9 亚型 AIV 参考株

2.3 HA 基因关键氨基酸变异分析

参照人源 H3N2 流感病毒 A/Achi/2/1968 毒株的 HA 基因氨基酸序列，推导并比较 80 个毒株HA 基因关键位点的氨基酸序列。结果显示：80 株病毒 HA 基因裂解位点氨基酸序列（321~329）中，除 1 株为 PSRSSN、1 株为 PSRSNR 外，其余 78株均为 PSRSSR，均符合低致病性禽流感特征。这些毒株的裂解位点氨基酸序列虽为低致病性特征，但不同于参考毒株 Y280（PARSSR），其第 2 位氨基酸残基由非极性氨基酸（A）突变为极性氨基酸（S）。通过核苷酸序列分析发现，这 80 株毒株 HA 裂解位点序列的第 5 位氨基酸残基均为 S，由 AGT 编码。

H9 亚 型 AIV HA 基因在 109、161、163、191、198、202、203 和 146~150 及 232~237 位（H9序列位置）构成受体结合位点的袋状结构。80 株病毒基因受体结合位点右侧壁（146~150）比较保守，主要模式为 GTSKA，受体结合位点左侧壁（232~237）中的 234 和 235 位正在发生突变，主要模式为 NGLMGR，而国内参考毒株 Y280 的模式为 NGLQGR，BJ94、F98 的模式为 NGQQGR。受体结合位点的改变主要是在 198 位，呈现 T/V/A/K 的突变，226 位氨基酸位点与唾液酸受体α-2,6Gal 和 α-2,3Gal 的结合特性有关。本研究中的所有 H9N2 亚型 AIV 的 226 位氨基酸均为亮氨酸（L），而早期的大多为谷氨酰胺（Q）。这说明2013 年以后的 H9N2 病毒具备了结合 α-2,6Gal 唾液酸受体的能力，病毒感染哺乳动物，甚至是人的概率大大增加（表 2）。

表 2 H9 亚型 AIV 裂解位点和袋状结合区的突变

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