2018非洲猪瘟病毒中国株的分子鉴定

非洲猪瘟（Africanswine fever，ASF）为世界动物卫生组织法定报告疫病，可导致家猪高热、出血、共济失调、食欲废绝，死亡率接近100%。其病原为虹彩病毒科、非洲猪瘟病毒属的非洲猪瘟病毒（African swine fever virus，ASFV）。ASFV是一种有囊膜的双链DNA病毒，最早于1921年在非洲肯尼亚被报道，2007年传入格鲁吉亚，之后扩散到东欧其他国家，包括俄罗斯（2007年）、乌克兰（2012年）、白俄罗斯（2013年）、立陶宛（2014年）、爱沙尼亚（2014年）、波兰（2014年）、拉脱维亚（2014年）、罗马尼亚（2017年）、捷克共和国（2017年）和匈牙利（2018年）。

2018年7月1日至8月1日，中国辽宁省沈阳市沈北区某农场383头猪中共47头发生不明原因的死亡。剖检时可见猪脾脏极度肿胀，严重坏死，呈现典型的ASF病变。其他病变包括扁桃体和肺部出血，下颌和肠系膜淋巴结的大理石样病变，以及胃浆膜的大面积弥漫性出血。采集该农场的2头死亡猪和6头生猪样品送至生物安全防护三级实验室，按照世界动物卫生组织建议的ASFV实时定量PCR方法进行检测，结果证实中国发生首例ASFV感染。

在确认ASFV感染后，研究人员使用3对特异性引物对来自ASFV感染样品的核酸提取物进行常规PCR扩增。扩增基因片段包括：编码p72衣壳蛋白B646L基因的部分基因片段、编码CD2v蛋白的EP402R基因片段以及位于I73R和I329L之间的串联重复序列（tandemrepeats sequence，TRS）。

对这3个扩增产物进行核苷酸测序，并将得到的序列登录在GenBank中（登录号：MH722357、MH735142和MH735144）。使用p72部分序列进行基因型的系统进化树分析，并使用CD2v部分序列进行血清群的系统进化树分析，使用MEGA 5.0软件构建系统进化树。结果显示，该分离株（命名为：China 2018/1）属于基因II型（图1A）和血清8群（图1B）。

ASFV的基因分型通常基于p72基因序列。在ASF爆发期间，这种基因分型方法可用于毒株溯源。本研究将China2018/1分类为基因II型（图1A），其序列与其他基因II型序列具有极高的同源性。

血清学分型是另一种基于血细胞吸附抑制（hemadsorptioninhibition，HAI）分类ASFV的方法。目前，ASFV已经确定了8个血清群。血清分群与基因型不一定完全相关。例如，血清1、2和4群毒株同时隶属于p72基因I型。本研究发现China 2018/1属于血清8群，这是通过系统进化树分析确定的，表明HAI特征与同源毒株的HAI特征相似性极高（图1B）。

图1  2018年非洲猪瘟病毒中国株（China2018/1）的系统进化树分析

A:基于p72基因的基因分型结果；B:基于CD2v基因的血清分群结果

研究人员将Georgia/2007/1（基因II型代表株）与China 2018/1进行了比较。China 2018/1有一个10bp的冗余片段（5'-GGAATATATA-3'）插入到I73R和I329L基因之间的TRS中，与Bel13/Grodno、Ukr12/Zapo、Lt14/1490、Lt14/1482、Pol14/Sz和Pol14/Krus毒株相同。

ASF对全球养猪业造成了巨大的损失，特别是对于大规模养猪和猪肉消费大国。2018年8月在中国首次爆发ASF疫情，经进化树分析发现，该毒株很可能来自于东欧和非洲，与Bel13/Grodno、Voronezh 2016，Mal 2011/01和ZIM/2015/01高度同源。

由于ASFV是具有稳定基因组的大型DNA病毒，因此，China 2018/1的基因序列与广泛分布的基因II型毒株序列具有极高的同源性，这并不出乎意料。然而，China 2018/1是如何传入中国的，还有待进一步的研究来阐明。