时间:2018-07-20 点击: 次 来源:宠之情宠物医师网 作者:吕艳丽 - 小 + 大
有学者通过抗猫AGP抗体流式细胞技术对健康猫和包括患FIP在内的病猫机体的白细胞结合的AGP水平进行研究,发现AGP阳性白细胞存在于猫的血液中,尤其在炎症反应期,但这种方法费用高、试验难度大,临床诊断的应用价值不大。 1.1.7尸体剖检和组织病理学变化 细致的尸体剖检和组织病理学检查可准确判断FIP。因为FIP引起的大体和组织病理学变化很固定。但是兽医病理学家不愿意像诊断肿瘤一样对FIP做出确诊。为此,引入了免疫组织化学检查进行最终确诊,但免疫组化方法难以成为临床常规诊断方法。 1.2 直接实验 虽然通过病史、临床症状、体格检查和间接地实验室检查可以诊断FIP,但作为传染性疾病,确诊需要有病原学检测结果,即通过检测病毒抗原或者核酸予以明确诊断。通常有两条途径:(1)通过免疫组化技术测定损伤组织或病变组织中的巨噬细胞内的病毒蛋白,(2)通过各种RT-PCR技术测定病毒的核酸。 1.2.1RT-PCR试验 RT-PCR技术用于FIP的诊断至今已经20余年,如今已经有商品化的试剂盒投放市场。诊断方法包括常规RT-PCR,窼式RT-PCR和real time RT-PCR等。这些方法均可检出粪便、血液和组织中的猫冠状病毒RNA。比较而言,窼式RT-PCR比常规RT-PCR敏感性和特异性更高,但假阳性反应高,原因为实验室污染所致。real time RT-PCR 可以避免这些问题且敏感性更高。对于FIP的临床诊断而言,PCR设计的目标是建立能够区分FIPV和FECV的方法。早期,基于肠道冠状病毒仅出现在肠道中,不在其他组织中复制这一理论,研究人员建立了RT-PCR方法,对确诊为FIP的病例进行了检测,特异性高达93%。其它研究人员采用这一方法对健康猫进行检测,54%的健康猫,尤其是6-12月龄的幼猫,检测结果阳性。后者检测结果在随后得到了实验验证,猫感染肠道冠状病毒后可出现病毒血症,感染14天后可从40%的猫的血液中检测到FECV;14%的猫血液带毒时间长达48天;在粪便排毒停止后,仍可从数个内脏器官中检出FECV。 近年来的研究发现,FECV在3c基因和S1/S2基因切割位点发生突变,将发展成为引起FIP的强毒株,在病变部位,超过98%的FIPV发生了这种突变。许多实验室以这些突变位点为目标设计引物,建立RT-PCR用于临床诊断,但尚不清楚在血液样本中是否存在能够检出的这种变异株。即使建立的FIPV检测方法敏感性和特异性再强,许多FIP自然感染病例的血液、血浆和浓缩的白细胞中仍检测不到病毒的RNA。 猫冠状病毒realtime RT-PCR试验既可探测排毒情况,又能很好的定量检测排毒水平和排毒频率,但操作时应注意粪便中的抑制剂。猫初次感染时,可大量排毒数周至数月,随着时间的推移,排毒量逐渐减少,如果不再次暴露于病毒中,甚至停止排毒,但也有部分猫可持久大量排毒。有的猫停止排毒后又成为了易感猫。 FECV是猫最常见的肠道病原体,无论是健康猫还是有腹泻症状的猫都可通过粪便排毒。其致病力弱存活时间短。如果不打算在养殖场所净化FECV,就不必对粪便进行病毒检测。 有些养猫者为了诊断FIP或者排除FIPV为感染源等各种原因,希望检测猫粪便中的冠状病毒。尽管FIP病猫经常从肠道中排出FECV,但其排毒量很少,低于健康猫的排毒量,且排出的病毒并非FIP生物型。因此,这种检测没有意义,应予以放弃。因为在猫舍中,大多数猫在任何时间都可能向外界排出FECV,而在此生活的成年猫尽管排毒但发展成为FIP的几率很小。然而,也有证据表明,在一个给定的时间内,一个猫群中,排出冠状病毒的猫的比例和排出冠状病毒的水平越高,该猫群发生FIP的几率就越大。 1.2.2免疫学方法 用于FIPV抗原检测的方法包括疾病组织的免疫组化法,液体的免疫荧光和免疫过氧化物酶法等,这些检测方法的敏感性与PCR方法相当,但受包括试剂的质量、样本、实验人员的经验等在内的多种条件的制约。免疫荧光比免疫过氧化物酶方法敏感但实验条件要求高,如,需要做冰冻切片并需要荧光显微镜;免疫过氧化物酶法以福尔马林固定、石蜡包埋的组织切片为研究对象,要求取样后尽快进行固定和包埋。出现假阴性的原因与待检组织的质量和所用试剂等有关。 应充分利用疑似FIP动物的渗出液或其它液体进行免疫组化检测。FIP猫的渗出液中含有被巨噬细胞吞噬的FIPV病毒粒子,可将渗出液离心,取沉淀物进行免疫组化检测。该技术用于有神经症状的猫的脑脊液的FIPV的诊断获得了成功。 可能存在巨噬细胞非特异性染色的问题。采用直接免疫荧光方法将17例具有胸腹水的猫死前渗出液的检测结果同病理学检验结果进行了比较,12例直接免疫荧光检测阳性的猫中有10例组织病理学结果为阳性,另外2例为阴性。敏感性100%,而特异性71.4%。对8份直接免疫荧光方法检测阳性的样本置于4℃和室温(20℃-22℃)下,至少在2天内,2种保存条件下的腹水样本检测结果不变。 2 猫传染性腹膜炎的治疗 用于FIP治疗的方法有3类:第一种,使用对其它病毒有效的药物进行治疗,如人的抗HIV-1和抗乙型和丙型肝炎病毒的药物;第二种,单独使用无效,与其它抗病毒药物合用有治疗意义,如将干扰素α同治疗乙肝和丙肝的药物如病毒唑(对猫而言,该药物副作用大于治疗效果)、替诺福韦和恩替卡韦同用;第3种,刺激机体非特异性免疫功能,战胜病毒。不管采用哪种方法,首先应保证治疗安全。 |
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