河北省部分猪场送检样品的猪蓝耳病抗体水平分析

猪蓝耳病（PRRS）是由套式病毒目的猪蓝耳病毒（PRRSV）引起的猪繁殖障碍、高热，出现呼吸道症状的一种传染病。本病于 20 世纪 80 年代末首先在美国被发现，后迅速蔓延至其他国家，20 世纪 90 年代传入我国。本病具有高致死性，不仅会使仔猪成活率降低，还会导致育肥猪生长停滞，对养猪业危害较大。目前PRRSV两个基因型：一个是欧洲型，通常引起经典型 PRRS；另一个是美洲型，引起变异型 PRRS，危害往往更严重，会引发猪的急性死亡。由于 PRRSV 基因组有 10 个开放阅读框，且 ORF1、ORF3、ORF5 极易变异，使得 PRRS 防治变得非常困难。

目前疫苗免疫仍是 PRRS 防控的重要措施之一，因此对猪群 PRRS 抗体水平的检测十分重要。它既可以评价免疫效果，也可以了解猪群健康状况，以便猪场及时调整免疫程序，从而减少经济损失。

本研究通过对河北省内不同规模猪场送检的血样进行 PRRS 抗体检测，对检测数据进行汇总分析，寻求 PRRS 的流行规律，为 PRRS 防控提供一些数据支持。

1　材料与方法

1.1　临床样品

2016—2017年来自河北省保定、石家庄、沧州、张家口、邯郸、衡水、邢台等 7 个地区送检的，对种群分类较为明确的猪场血样共计 1 182 份，其中散养户 11 家 196 份，中型猪场 5 家 380 份，大型猪场 2 家 606 份（表 1）。每只猪采血 2~3 mL，室温静置至血清析出，分离血清，置于 4 ℃保存。

1.2　主要试剂

猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体检测试剂盒（美国 IDEXX）：购自北京爱德士元亨生物科技有限公司；Multiskan FC 型酶标仪：购自 Thermo 公司。

1.3　试验方法

试验前将抗体试剂盒与血样室温孵育 1 h，用血清稀释板将血样进行 40 倍稀释（5 μL 血清 +195 μL样品稀释液）；将稀释好的样品转至抗原包被板中，每孔 100 μL，分别加入 2 孔阴性对照与 2 孔阳性对照，每孔 100 μL，阴阳性对照不稀释；室温下孵育30 min，弃去孔中液体，用配好的洗液洗涤板孔（洗液用蒸馏水 10 倍稀释），每孔 250 μL，洗涤 3~4次，最后一遍用力拍干；每孔加入 100 μL 酶标抗体，室温下孵育 30 min，弃去孔中液体后洗涤，重复操作；每孔加入 100 μL TMB 底物液，在室温下孵育15 min，最后加入终止液，每孔 100 μL，于酶标仪中 650 nm 条件下测量吸光值。

1.4　结果判定与计算

当阴性对照平均值＜ 0.15，阳性对照平均值 −阴性对照平均值＞ 0.15 时，试验结果有效。本试验通过 S/P 对结果进行判定。S/P=（样品 OD 值 − 阴性对照平均值）/（阳性对照平均值 − 阴性对照平均值）。当 S/P<0.4 时，判定为阴性；当 S/P ＞ 0.4 时，判定为阳性；当 S/P ＞ 2.5 时，如果样品数据离散度较高，则可能存在感染并发病，如果度较低，则可能存在感染但处于稳定期。

离散度计算公式：离散度 = D（样品方差）/ 样品平均值

2　结果与分析

2.1　不同规模猪场

对送检血样按规模猪场分类后，进行检测结果分析。结果显示，大型场阳性率最高，散户阳性率最低（表 2）。这可能与大型猪场有较为系统或者固定的免疫程序有关。

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