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一、确保抗体检测结果可靠性的关键因素
1、抗原毒株是否与疫苗毒株一致
抗原毒株与疫苗所含毒株要一致，以避免抗原毒株差异对抗体结果造成影响。
1.1 H9亚型禽流感抗体
目前H9的毒株有标准毒株RE-2株、F株、流行株、WJ株等，在检测抗体过程中由于抗原与所用疫苗毒株不一致造成抗体差异显著，（特别是肉食鸡）。通过（表1）可见:毒株不一致检测结果相差1-2个滴度。 表1 三个H9的毒株抗体检测的差异 
1.2新城疫抗体
目前新城疫流行毒株主要为Ⅶd型，对使用了含有Ⅶ毒株的疫苗检测时要应用不同的基因型抗原分别进行检测，以免影响结果的准确性。通过大量的临床检测分析可见：免疫过NDⅦ型的疫苗,用Ⅶ型与La Sota抗原分别检测，Ⅶ抗原检测结果高于La Sota抗原1.5-2个滴度左右。免疫过La Sota毒株的疫苗，用Ⅶ型与La Sota抗原分别检测，La Sota抗原检测结果稍高于Ⅶ抗原检测结果0.5-1个滴度。特别是对肉食鸡群的检测差异更明显，通过集团客户的应用与多方实验室的检测统计，La Sota毒株免疫的鸡群ND高峰抗体为5-6（XLog2), Ⅶ型毒株免疫的鸡群ND高峰抗体为7-8或以上（XLog2)。
1.3 H5不同抗原相的差异:
对于目前禽流感H5亚型的疫苗免疫后的检测，要应用相对应公司提供的抗原进行检测。对于疑似发病的血样或卵黄样品的检测要应用野毒株抗原检测更明显。
2、红细胞对抗体结果的影响
目前进行HI抗体检测国标要求应用1%的红细胞，同时要求应用3只 SPF公鸡混合血液，对于SPF公鸡很多实验室可能达不到要求，在基层主要应用没有经过免疫或抗体水平非常低的公鸡，应该注意公鸡的抗体水平（ND 、 H9 、H5 （RE-7）、H5（RE-6））要在23-4以下,如果高与这个水平，就会造成抗原在进行HA检测的时候HA值偏小，试验结果不准确，所以在每次实验前都要有阳性对照与阴性对照，以检测试剂的可靠性，同时红细胞浓度的高低也会对实验结果造成差异。
2.1 红细胞浓度偏低：利用这样的红细胞做出的HA结果要比标准的结果偏高，由此做出的HI的效价要比标准的结果偏高。
2.2 红细胞浓度偏高：利用这样的红细胞做出的HA结果要比标准的结果偏低，由此做出的HI的效价要比标准的结果偏低。
2.3 红细胞全部下滑：当配制抗原时，配制工作抗原效价过低，不足以凝集鸡红细胞。
2.4 前凝集现象：一般水禽血清在检测的过程中会出现。用对应水禽的1%的红细胞可以避免，或者应用预热处理法，在抗体水平高的情况下不需要处理。
2.5 前不凝集现象：HA试验时会出现这样的现象，一般抗原的浓度高会出现不凝集现象，随着浓度的稀释这种现象消失。原因为抗原抗体比例不适合，抗原或抗体过多，抗原抗体结合点的聚合一开始就达到饱和，形成小的复合物，不能再继续与相邻的抗原、抗体结合，不能形成大的聚集颗粒，不出现可见反应，即出现不凝集现象。
3．工作抗原的配制和标定
3.1 工作抗原的配制
首先检测HA，结果判定要严格100%凝集，根据HA结果配制4单位病毒与8单位病毒。
附：ND的血凝价HA=28
4单位病毒为 28/22=26
8单位病毒为 28/23=25
即把标准抗原做25或26稀释。配置后要进行标定。只有标定成立的工作抗原才能准确反映真实抗体水平。
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