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金颜辉*1 黄盛兴2 黄雁1
（1 福建省动物疫病预防控制中心 350003；
2 建瓯市小松镇畜牧兽医站 353111） 摘要：一组实验猪场应用PRRS灭活疫苗免疫猪场生猪，采集同一份猪血清ELISA试剂盒检测，测不出免疫抗体（0∕14），金标检出阳性率（9∕14）64.28％；另一组用进口减毒活苗免疫的同一份猪血清ELISA检出阳性数百分百（16∕16），金标检不出（0∕16）。另一实验猪场灭活苗两次免疫，金标检出阳性率（16∕21）76.19％，ELISA检不出；活疫苗两次免疫， ELISA检出阳性率（16∕21）76.19％，金标检不出。结论不同疫苗免疫效果，用不同检测方法，结果差异很大。
关键词：猪蓝耳病，抗体，监测
猪繁殖与呼吸综合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS）是由PRRSV引起的一种高度接触性的传染病，以引起母猪繁殖障碍、仔猪和育成猪呼吸道症状及高死亡率为主要特征。该病于1987年首次在北美发现[1]，之后在世界范围内迅速传播，我国于1996年首次分离到该病毒[2]，最近几年PRRSV也已成为我国重要的猪传染病病原之一。特别是2006年出现变异毒株后，对我国养猪业造成了更加严重的危害和经济损失[3]。
针对目前我国猪蓝耳病疫苗免疫后抗体水平监测中存在的一些问题，我们应用猪蓝耳病金标试纸条及进口ELISA试剂盒，对经猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗（NVDC-JXA1株）和进口减毒活疫苗免疫后采集的猪血清进行比对实验。
免疫程序为： 18日龄分两组免疫，灭活疫苗组免疫20天后采血清样检测，同一份血清检测结果：灭活苗免疫组ELISA检测血清抗体滴度检不出（0∕14），金标检出阳性率（9∕14）64.28％；进口减毒活疫苗用同样免疫程序，采血清样检测ELISA检出阳性率百分百（16∕16），金标检不出。另一猪场实验结果：免疫程序为 疫苗两次免疫间隔两周，二免后28天采血样检测，灭活疫苗免疫的ELISA检不出（0∕21），金标检出阳性率（16∕21）76.19％，活苗免疫的ELISA检出阳性率（16∕21）76.19％，金标检不出；金标检测中的3份阴性ELISA检测是阳性， ELISA检测中的3份阴性金标检测是阳性。
1 材料与方法
1.1 材料
选取两处健康猪场，经猪蓝耳病弱毒疫苗及灭活疫苗免疫后，采血，按常规方法分离血清，备检。
1.2 试剂盒
猪蓝耳病抗体检测试剂盒（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus Antibody Test Kit）购自IDEXX公司；猪蓝耳病金标试纸条来自本中心福建省科技厅（2007）重大科技项目专题二“福建省畜禽重大疫病诊断及防治技术研究”课题组提供。
1.3 操作步骤
1.3.1 ELISA试剂盒：按试剂盒说明书，应用猪蓝耳病抗体检测试剂盒对采集的猪血清进行抗体检测，步骤如下：血清用样品稀释液进行40倍稀释，浓缩洗液恢复到室温后混匀并用去离子水做10倍稀释。在试剂盒自带96孔板的C1、D1、C2、D2中加入100ul未稀释的阴性对照样品，在A1、B1、A2、B2孔中加入100ul未稀释的阳性对照样品，被检样品各加两孔，每孔100ul。室温孵育30min，甩去液体，每孔用洗液300ul清洗3-5次。每孔加入100ul酶标抗体，室温孵育30min。甩去液体，每孔用洗液300ul清洗3-5次。每孔加入100ul TMB底物溶液，室温孵育15min。加入100ul终止液并读取OD650nm。按试剂盒给定计算公式进行判定。
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