疫病监测
凝集试验的种类和方法
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凝集试验的原理是：颗粒抗原(红细胞、细菌、病毒等)与含有相应抗体的血清混合,在电解质的参与下, 则能发生特异性结合，形成抗原抗体复合物,这种复合物呈均匀状态悬浮于液体中,这时肉眼是看不见的,当抗原抗体复合物在一定浓度的电解质作用下,复合物表面的电荷大部分被消除,失去了互相排斥的作用，复合物之间互相吸引，凝集成团,即出现肉眼可见的凝集现象。作用于凝集反应的抗原,称为凝集原,与之相结合的抗体,称为凝集素。 凝集反应按其原理可分为直接凝集反应和间接凝集反应两类。用于猪病诊断的常用操作方法有以下几种。 (1)全血平板凝集试验 本试验在实践中主要用于细菌性疾病的抗体检测和抗原(经分离培养后)的鉴定。现举例用已知猪丹毒抗原(丹毒杆菌的纯培养液)测定被检猪血清中的抗体。其操作步骤如下： ①材料 猪丹毒凝集抗原,玻片,9号针头,酒精棉球,酒精灯,铅耳(取血环)等。 ②操作 用铂耳取已知抗原1滴,置于玻片上。用酒精棉球擦拭针头,铂耳在酒精灯上灼烧消毒。用针头刺破被检猪的耳静脉,以铂耳取血与玻片上的抗原等量混合,在2－3分钟内观察结果。 ③结果判定 出现颗粒状的凝集,为阳性反应。否则为阴性。 (2)试管凝集试验 试管凝集试验是一种定量法,用于测定被检血清或其他体液中有否某种抗体及其效价,可作临床的辅助诊断,或用于流行病学监测。在猪场中,本法常用于猪布氏杆菌病的诊断。 ①材料 布氏杆菌病试管凝集抗原(1：20倍稀释),布氏杆菌病阳性血清、阴性血清(1：25倍稀释),稀释液(0.5% 石炭酸生理盐水),灭菌小试管,1毫升吸管,试管架,待检血清等。 ②操作 取试管7支置于试管架上,设阳性和阴性血清及抗原对照各1支,测定管4支,以后每增加一个样品,只需增加4支测定管。 按表2示意稀释血清,加抗原,完成后每支管内应含 1毫升液体。 加入抗原后,将试管充分振荡,置37℃温箱反应24小时后，判定结果。 ③判定标准 "一" 液体均匀混浊,管底无凝集物,不凝集。 "+" 液体透明度较差,管底有少量凝集物,为25%凝集。 "++" 液体中等混浊,管底有中等量的伞状沉淀,50%菌体凝集。 "+++" 液体几乎透明,管底有明显伞状沉淀,75%菌体凝集。 "++++" 液体完全透明,管底出现大片的伞状沉淀,100% 菌体凝集。 结果判定：以出现50%菌体凝集的血清最高稀释度为该血清的凝集价。在检测猪布氏杆菌病时,血清凝集价在1：50以上时，可判为阳性反应，若凝集价为1：25则为可疑(需复试验1次)。如猪群中基本无阳性反应,则凝集价1：25也可判为阴性。 |
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