疫病监测
猪细菌的分离、培养和鉴定
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猪的细菌性疾病种类很多,危害不小,常见的细菌病有仔猪黄痢、白痢、猪水肿病、副伤寒、猪丹毒、猪肺疫、链球菌病等,其中有的疾病可以一目了然(如仔猪黄痢、白痢等),易于诊断,有些疾病则一时难以确诊(如副伤寒、猪接触传染性胸膜 肺炎等),而更多的细菌病是并发或继发感染的,为了做到及时、正确地诊断猪病,规模化的猪场有必要开展细菌的分离、培养和鉴定工作,同时还可将分离出的细菌,通过抑菌试验筛选出敏感性强、疗效好的抗菌药物进行治疗。掌握了细菌学的检查技术,还可开展对猪舍消毒效果的测定,饮用水、饲料中的细菌学检查等项工作。 规模化猪场的化验室开展这项工作,需要一定的设备和条件,操作人员应该具备兽医微生物学的基本知识和实验室的操作技术、要求做到正确、熟练,其内容包括病料的采集,细菌的分离培养,形态观察,生化试验和动物接种试验等。 下面以猪肺疫的病原-多杀性巴氏杆菌的分离、培养和鉴定为例,作简要介绍。 1.采样与病原分离 猪肺疫病原为多杀性巴氏杆菌,临诊上可分为3型：最急性型,见于流行初期,常无明显的症状而突然死亡；急性型,较为常见,多呈急性胸膜肺炎症状,病程 3－5天；慢性型主要表现为慢性肺炎的症状。 (1)病料的采取 生前采取血液、水肿液，死后无菌操作采取心血、肝、脾、淋巴结、骨髓或肺部病灶等。 (2)病料的处理 脏器或淋巴结应先作表面除杂，将组织块浸渍于95%酒精中立即取出，引火自燃,这样反复2－3 次,或在沸水中浸烫数秒钟,然后用灭菌刀剖切，其剖面在血琼脂平板一侧涂抹,面积是平板的1/5。再用铅耳在涂层上划抹分离,分离时应涂抹数个平板,以提高检出机会。 (3)直接镜检 血液作推片,其他脏器以剖面作涂片各若干片,用数片以甲醇固定作革兰氏染色,另数片作瑞氏或美蓝染色。如发现大量革兰氏阴性、两端钝圆、中央微凸的短小杆菌,即可初步确诊。本菌无鞭毛,不能运动,能形成荚膜。单染菌体呈卵圆形,两端着色深,中央着色浅,好像两个并列的球菌,故有两极杆菌之称。病料用印度墨汁染料染色,可清晰地见到细菌的荚膜。 (4)分离培养 最好用麦康凯琼脂和鲜血琼脂平板同时进行分离培养,本菌在麦康凯琼脂上不生长,而在鲜血琼脂平板上,培养24小时后,可长成淡灰白色、圆形、湿润、不溶血的露珠样小菌落。涂片染色镜检,为革兰氏阴性小杆菌,再进一步可作生化和动物接种试验。 2.病原的鉴定 (1)生化反应 本菌在48小时内可分解葡萄糖、果糖、单奶糖、庶糖和甘露醇等,产酸不产气，一般对乳糖、鼠李糖、菊糖、水杨苷和肌醇等不发酵。可产生硫化氢和氨,能形成被基质,甲基红(MR)试验和维培二氏(V-P)试验均为阴性。接触酶和氧化酶均为阳性。石蕊牛乳无变化,不液化明胶。 (2)动物接种试验 取病料在灭菌研钵中加生理盐水 1：10制成乳剂,如作纯培养的毒力鉴定,用4%血清肉汤24 小时培养液或取血平板上菌落制成生理盐水菌液,皮下或腹腔接种小白鼠2－4只,每只注射0.2毫升,一般经10个小时左右致死。死亡小白鼠的呼吸道及消化道粘膜有出血小点,肝肿大、有坏死灶。取心血及肝脏涂片染色镜检,见大量两极浓染的细菌,即可确诊。 (3)血清型鉴定 多杀性巴氏杆菌可分为多种血清型。目前国际上公认的分型方法是将特异性荚膜抗原吸附于红细胞上,作被动血凝试验,将本菌分为A,B,D,E 4个血清群,又将菌体抗原作凝集反应,将本菌分为12个血清型,用阿拉伯数字表示。猪巴氏杆菌的血清型以5：A和6： B为主。 抗原和相应的抗体在动物体内或体外都能发生特异性结合反应,这种反应称为抗原抗体反应,习惯上把体内的抗原抗体反应称为免疫反应,体外的抗原抗体反应称为血清学反应, 因为抗体主要存在于血清。 血清学反应可以用已知的抗体检查未知的抗原,也可用已知的抗原测定未知的抗体。人们根据抗体能与相应抗原发生反应并出现可见的抗原-抗体复合物的原理,设计了许多血清学诊断方法,不仅可以检测动物体内乃至体外的病原微生物,或其抗原性成分,而且还可以测定动物机体对病原微生物侵袭或对其抗原成分的免疫反应。在抗原-抗体复合物呈不可见状态时,可以通过琼脂扩散、凝集试验以及酶标记等指示系统,使其变为可见或可测状态。 由于血清学反应具有高度的特异性和敏感性,因此在兽医学上广泛用于对许多传染病的诊断、病原微生物的鉴定及抗体的检测等。 目前已知的血清学诊断方法很多,随着科学在术的进步,新方法、新技术还在不断地出现,要求达到微量、准确、快速、 简便。 |
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