|
摘要：赤羽病是目前对我国养牛业和养羊业危害较为严重的疫病，该病在我国广泛存在，一旦暴发将对我国畜牧业造成严重的经济损失。为了防制和消灭该病，必须迅速、准确地作出诊断。经过几十年的努力，赤羽病诊断技术从最早的病毒分离鉴定到血清学试验，再到分子生物学技术，已逐渐向着更敏感、更特异、更方便、更经济的方向发展。文章就赤羽病病毒的实验室检测技术研究进展作一综述。
关键词：赤羽病病毒；检测方法；研究进展 赤羽病（Akabane disease，AKAD）又称阿卡斑病，是由布尼病毒科布尼病毒属辛波（Simbu）病毒群的赤羽病病毒（Akabane virus，AKAV）引起的牛、绵羊和山羊等动物的一种以流产、早产、死胎、胎儿畸形、木乃伊、新生胎儿发生关节弯曲和积水性无脑综合征（arthrogryposis-hydraencephaly，AH综合征） 为临床特征的病毒性传染病。
本病为虫媒性传染病，传播媒介为吸血的蚊、库蠓等。该病首次于1961年在日本群马县赤羽村的畜舍内采集的2种蚊虫体内分离出病毒 ，并将其命名为赤羽病病毒，因而得名。在日本从骚扰伊蚊（Aebes vex－
ans）和三带缘库蚊（Culex tritaeniorhychus）分离到病毒后，澳大利亚也多次从短跗蠓（Culoides brevitarsis）分离出病毒。本病多发生于热带和温带，澳大利亚、以色列、日本、肯尼亚、南非、印度尼西亚、马来西亚、菲律宾都曾有本病的报道，我国部分地区也有血清抗体阳性动物的报道，并于1998年首次被农业部动物检疫所分离鉴定。
赤羽病是目前对我国养牛业和养羊业危害较为严重的疫病，是世界动物卫生组织（OIE）法定通报性疾
病，也是我国从国外进口牛、羊必须检测的 7 种疫病之一。由于感染动物一般不出现临床症状，但在每年 8、9月份发生流产及早产且数量激增，至10月份为最高峰，往往被误认为由热应激引起，不易在感染早期发现。
研究表明，该病在我国广泛存在，一旦暴发将给我国畜牧业造成严重的经济损失。因此，及早发现和确诊牛、羊群是否被AKAV感染，并采取相应措施防止该病继续扩散，是生产中减少损失的有效途径。为了防制和消灭赤羽病，必须迅速、准确地作出诊断。经过几十年的努力，赤羽病诊断技术从最早的病毒分离鉴定到血清学试验，再到分子生物学技术，已逐渐向着更敏感、更特异、更方便、更经济的方向发展。本文就赤羽病病毒的检测技术研究进展作一综述。
1 病原学检查
1.1 直接镜检 取病畜的血、肺、肝和脾及胎儿、胎盘和脑组织材料制成超薄切片，负染，在电镜下检查病毒并观察其形态特征，病毒呈球形，直径70~139 nm，有囊膜。李树清等在国内首次用电镜照片证实了AKAV 在Vero细胞上的生长和其形态学特征。
1.2 病毒分离鉴定 分离和鉴定病毒是确诊该病的最好方法。从成年动物分离病毒比较困难，因其缺乏临床症状，难于掌握病毒血症时期，通常从流产的胎儿和死胎中分离病毒。将胎儿的各种病料，特别是脑、脑室液、脊髓、肌肉、胎儿、胎盘以及肺、肝、脾等混合病料剪成小块，研磨后加入青链霉素处理，然后5 000 r/min离心10 min，取上清脑内接种乳鼠或Vero、Hmlu-1和BHK-21等细胞，观察神经症状，出现症状时收获病毒；也可将上清液接种7~9日龄鸡胚卵黄囊，如果有病毒存在，则可引起鸡胚发生AH综合征（鸡胚脑部积水
、大脑缺损、发育不全和关节弯曲等异常胎儿体态），并可从病变鸡胚中分离到病毒。随后即可用特异免疫血清进行中和试验或补体结合试验等鉴定病毒。
2 血清学诊断
牛羊妊娠后期胎儿有产生抗体的能力，因此测定新生而未吃初乳的犊牛或羔羊血清中的特异性抗体，常有较高的诊断意义。
AKAV与辛波群中的其他成员在交叉补体结合试验中表现有共同的群抗原，但在中和试验、血凝抑制试验和溶血抑制试验中具有很高的特异性，不出现交叉反应。
2.1 琼脂凝胶免疫扩散试验（AGID）这是一种快速检测方法，可运用已知的AKAV抗原检测待检血清样品中抗AKAV抗体。刘焕章等应用引自美国和日本的赤羽病病毒和标准阳性血清，制备了琼脂免疫扩散试验抗原和高免阳性血清，建立了赤羽病琼脂免疫扩散试验诊断方法。应用此方法对上海、杭州、广州等地的1 383
头牛进行了检疫， AGID抗体阳性牛746头，阳性率54.0 ％，与流行情况相符。同时对从澳大利亚、美国、新西兰和加拿大等国进口的牛、羊、猪血清162头份进行了检疫，全部为AGID抗体阴性。此法操作简便，能很快得到试验结果，但由于所用的AKAV抗原也能够检出Aino、Tinaroo和Peaton病毒抗体，因此该方法的特异性较差，敏感性也较低。
|
