非洲猪瘟病毒荧光PCR检测假阳性的原因与预防

  7、正确规范操作

  （1）从事PCR试验的检测人员，必须经培训合格后上岗，切实掌握PCR检测操作原理、方法和步骤，严格按照实验室建立的检测操作规程和作业指导书进行各项实验活动。在ASFV检测的样品制备阶段，样品须60 ℃水浴灭活处理不少于30 min，防止活病毒在实验室中造成污染和扩散。所有ASFV检测样品在灭活之前以及所有操作步骤必须在生物安全柜或者负压实验室进行处理，处理完毕之后，对操作台面和房间进行彻底消毒。

  （2）人员进入不同区域，须穿戴各区域专用的工作服、手套、口罩、帽子，切忌从PCR扩增室里穿着工作服，戴着手套和帽字回流到样品准备室。发现手套有污染时，应立即更换手套，完成试验离开工作场所时，要脱掉手套、更换工作服。

  （3）取样、加液（样本、反应体系成分等）时，应先通过瞬时离心等方式，使管盖上液体完全沉于管底；开管动作要轻，以防管内液体溅出或产生气溶胶污染环境。

  （4）PCR反应体系配制好后，应加入核酸模板，然后盖紧反应管。PCR扩增完成后，尽量减少打开密封反应体系的次数，如必须打开，应在独立专用区域内。

  （5）禁止把PCR产物带到配制PCR体系的区域内，同时禁止在配制PCR反应体系的区域内，操作含核酸或质粒的溶液。

  8、严格实验室管理

  （1）加强兽医实验室体系建设，制订科学、合理的PCR检测实验相关制度文件、程序文件、作业指导书以及试验记录表单等，相关内容一定要具备科学性、指导性，并且可操作性强，以便实验室人员随时查阅及操作。

  （2）加强实验室人员培训，真正做到对其试验行为的监督和监控，按照实验室质量体系要求，从“人、机、料、法、环、测”几个方面，实现对新进人员初始能力的“监督”和在岗人员工作能力的持续“监控”。

  （3）充分利用实验室人员比对、仪器比对、盲样测试和留样再测等形式，不断提高PCR检测能力和操作熟练程度，保证试验结果的准确性和可靠性。

  充分发挥省级实验室的确诊、培训、指导和督导作用省级实验室作为被授权可确诊ASF的实验室，其人员、环境条件、仪器设备、体系建设、技术能力与水平等方面条件大多明显优于市、县及第三方检测机构实验室，因此在做好ASF确诊工作的同时，要发挥其各方面的优势，加强对市、县及第三方检测机构实验室的培训、指导和督导，必要时开展现场巡查，确保所有开展ASFV检测实验室检测结果的准确可靠。

  三、结语

  目前，用于ASF检测的主要方法是荧光PCR，与其他检测方法比较，该方法灵敏性高、特异性强，便于快速检测，被广泛应用于ASF诊断和监测工作中。由于市、县以及部分第三方兽医实验室过去较少使用荧光PCR等分子生物学方法开展大规模病原学检测，还须进一步加强培训和实际操作，使其进一步熟练掌握该检测方法，让该方法在ASF防控工作中发挥应有的关键作用。

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