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猪繁殖与呼吸系统综合征实验室检测技术

时间:2011-03-16    点击: 次    来源:阳光畜牧网    作者:张文杰 - 小 + 大

    二、血清学检测
    对于规模化养殖场来说,猪群的日常抗体水平监测是选择疫苗、评估免疫程序合理性、掌握猪群健康状态的重要手段,同时也可从侧面反映猪场管理是否合理,因此是养殖企业疫病监测工作的重点。目前用于PRRSV抗体检测的方法有免疫荧光实验(IFA)、免疫过氧化物酶单层分析法(IPMA)、中和实验(SVN)和酶联免疫吸附试验(ELISA)。与其他方法相比,ELISA检测操作简便,易于标准化,快速敏感,非常适合进行大规模流行病调查和疫病监测。
    国内外学者在PRRSV抗体ELISA试剂盒的研发上做了大量研究,基于不同的PRRSV蛋白建立了不同的ELSIA试剂。 

    1、以核衣壳蛋白(N蛋白)作为主要包被抗原的PRRSV抗体间接ELISA检测试剂盒
    N蛋白在病毒粒子中含量较高,是PRRSV主要结构蛋白之一,保守性高,具有群特异性,能够同时用于检测欧洲株和美洲株,是最早用于试剂盒研究的蛋白,以此作为基础研发的试剂盒是市场上最早应用的商品化试剂盒,敏感性高、重复性好,应用广泛。
    N蛋白不能诱导产生病毒中和抗体,因此以N蛋白作为包被抗原的ELISA试剂无法反应机体的免疫状态,不适合用于对疫苗免疫效果监测。 
    2、以膜蛋白(M蛋白、GP2、GP3、GP4、GP5)作为主要包被抗原的PRRSV抗体间接ELISA检测试剂盒
    研究表明,M蛋白和GP5蛋白可诱导机体产生中和抗体,GP5蛋白参与细胞免疫和体液免疫,诱导产生主要的中和性抗体。因而,采用GP5蛋白作抗原的诊断试剂不仅能检测野毒感染状况,而且能解决N蛋白作抗原的诊断试剂无法反映机体免疫状况的缺陷,有利于疫苗抗体水平的检测,为猪场进行疫苗免疫效果评估提供了重要的技术手段。
    实验证实,以膜蛋白作抗原的ELISA诊断试剂盒与其他检测中和抗体的方法,如IFA、IPMA有很好的相关性,如下图所示所测血清转阳规律与IPMA相似。

 

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