鸡传染性喉气管炎研究进展

    Bagust等的研究表明潜伏感染在ILTV感染后7~10 d时即在三*神经节建立起来了，并且在急性感染后的初期，ILTV的潜伏感染能被检测到。Bagust等的另一个研究表明，与ILTV强毒株一样其弱毒疫苗株也能引起潜伏感染。应用气管组织培养的方法，ILTV强毒株经喉内途径感染后3~15个月，疫苗株感染后2~10个月，38%的强毒株感染鸡和44%的疫苗株感染鸡均有潜伏感染的ILTV被检测出来。这些潜伏感染的病毒可能在一些外界因素(如迁移新鸡舍，产蛋期等)的作用下被激活，激活的病毒可以扩散到易感鸡群，发生再感染。通常认为，用致弱的1LTV疫苗进行免疫，可以减少野生型病毒建立潜伏感染的几率。在PRV中，用最可能建立潜伏感染的接种方式接种致弱疫苗后，野毒株建立潜伏感染的能力大幅降低。同时删除g1和TK基因的ILTV突变子建立潜伏感染的能力下降。在研究疱疹病毒与潜伏感染相关的基因时发现一个潜伏相关转录子(LATs )，LATs位于UL区，在感染细胞中小量转录，证实与疱疹病毒的潜伏感染和再激活有关，但详细功能现在还不太清楚。

四、传染性喉气管炎病毒疫苗的研究进展

（一）当前疫苗所面临的问题 ILT是第一个研制出有效疫苗的禽的主要病毒性传染病，最初成功防止ILT的免疫是应用强毒株经泄殖腔接种，后来发现，使用细胞培养传代或鸡胚传代致弱的ILTV和经选择的地方流行温和型毒株等作为弱毒疫苗经眶下窦、点眼、滴鼻和饮水等也能使易感鸡群产生预期的保护力。目前国内外用于预防和控制ILT的疫苗大多是ILTV的弱毒株疫苗，应该说它在ILT的防治中起了非常重要的作用，但是这些弱毒株疫苗都存在以下缺点：

1.疫苗毒株毒力偏强。鸡群接种后有5％左右出现临床症状，清净鸡群一旦发病将引起

ILT暴发，导致重大损失，这是ILT防制中存在的主要问题。如果通过体外传代法继续使减毒苗的毒力降低，则该苗的免疫力也回大大降低，达不到预防的目的。

2.现有疫苗毒株在体内同强毒株一样能形成潜伏感染，并可散播病毒，具有潜在的生物

危险。Guy等报道了由于使用弱毒疫苗而造成ILT暴发的证据，他们认为弱毒疫苗株的毒力增强是由于在鸡体内传代的结果。他们通过对六个疫苗株和野毒株比较研究显示，疫苗株的DNA限制性酶切图谱分析同野毒株没有任何差别，但是疫苗株毒力弱于野毒株。另外他们将1株来自鸡胚的病毒及1株来自细胞培养的病毒在SPF鸡上连续传代研究表明，鸡胚来源的弱毒疫苗株在鸡体连续传代后导致其毒力增强，连续传10代后其毒力相当于高致病力的标准强毒株水平。Guy等还认为野外弱毒疫苗毒力增强是由于生物安全措施不当及饮水免疫时传给了非接种鸡群导致了体内传代造成。

3.疫苗株和野毒株目前尚无有效的方法进行鉴别，弱毒疫苗的使用回干扰疫情的监测和诊断，长期使用不利于ILT的根除。所以使用传统的疫苗进行免疫预防很难从根本上解决ILT的暴发与流行，这就急需研制安全、有效的新型疫苗以达到预防ILT的目的。

（二）新型疫苗的研究 随着分子生物学技术的发展和日趋完善，利用基因工程疫苗来预防ILT已经成为人们的共识。目前新型疫苗主要包括：基因工程缺失疫苗、基因工程亚单位疫苗、重组活载体疫苗和核酸疫苗。其中基因工程缺失疫苗是利用基因工程技术在病毒基因组中插入或缺失一段序列使病毒的某些基因不能表达，从而致弱病毒，同时又保持其较强的免疫原性；后三种疫苗关键之处在于选择具有保护性的抗原基因。

   对于基因工程缺失疫苗，目前已有许多学者作过尝试，主要针对TK基因缺失的重组疫苗，可保护免疫鸡群抵抗强毒攻击。但是，目前ILT基因工程缺失疫苗还没有得到商业化应用。如果上述疫苗能最终用于实践，我们有理由相信，它们将会为ILTV的根除做出巨大贡献。

    国内外已有许多学者做过研究，选取病毒糖蛋白gB基因制备亚单位疫苗免疫鸡，可100％保护鸡抵抗临床发生ILT或病毒增殖。但是使用亚单位疫苗的不利方面在于它不能在机体内复制，所需接种量大，制备成本高，同时病毒的弹性比较强，容易发生抗原变异，易于诱发对单一多肽免疫的抵抗。这些不利因素限制了亚单位疫苗的广泛应用。

    重组活载体疫苗由于其可达到一次免疫预防多种疾病的优点，深受科研人员的喜爱。目前可以选用的病毒载体有FPV、MDV、HVT及禽腺病毒等。由于gB基因是ILTV的重要保护性抗原基因，因此，同样也是构建充足病毒活载体疫苗的首选基因。Saif等构建了表达ILTV的重组HVT，王云峰将gB基因插入到FPV转移质粒载体中，通过同源重组获得了表达ILTV gB基因的重组鸡痘病毒并对6周龄SPF鸡进行了免疫接种。4周后用ILTV强毒株进行攻毒，结果表明，rFPV-gB可以诱导机体产生针对ILTV的特异性应答，并保护机体抵抗强毒的攻击。

    基因疫苗是近年来发展起来的一种新型第三代疫苗，是将含编码抗原蛋白基因的表达载体导入机体，使之在体内诱导免疫反应，他是通过DNA重组技术把抗原基因和表达载体重组构建成DNA疫苗的重组表达质粒DNA，它不仅可以诱导体液免疫应答，而且可以诱导细胞免疫应答，并兼有亚单位疫苗的安全性和弱毒疫苗的高效性，是人类在摸索简单有效的防制传染病疫苗时取得的优秀成果，已经成为国际疫苗研究领域最热门的课题之一。目前在家禽传染病领域，已报道的有禽流感、鸡新城疫、鸡传染性法氏囊病、传染性支气管炎、传染性喉气管炎和鸡马立克氏病等的DNA疫苗。目前人医用DNA疫苗也在进行临床实验，检测其安全性和有效性。

五、诊断

    根据ILT的临床症状及流行病学调查，可以初步诊断，但是近年来，随着国内鸡病疫情的复杂化，在一些地区流行的多是温和型病例，其症状和病变与ND、IB、IC、AI等在临床上有许多相似之处容易混淆，因此要确诊ILT必须依靠实验室检查，实验室诊断ILT主要依靠病毒分离及抗原和特异性抗体的检测，这是国际兽疫局所推荐的诊断方法。这些方法虽经典但费时且敏感性差，不能检测亚临床感染，而传染性喉气管炎潜伏感染占有重要地位，因此，近年来随着分子生物技术的发展较出现了更为快速、敏感、特异的检测手段，如核酸探针技术、PCR技术、RFLP技术等。

（一）病原的分离与鉴定 病毒主要存在于病鸡的气管及其渗出物中，肝、脾和血液中较少见。从死后不久患病鸡的气管分泌物和肺部采集病料，采用包涵体检查的方法可以做出初步诊断，这时传染性喉气管炎诊断的依据之一。但只有在发病的早期，才能经常观察到包涵体。同时也可以将病料接种鸡胚肝、鸡胚肾组织培养细胞，或者接种发育鸡胚、健康鸡进行分离。分离病毒后，可用电镜观察进行病原的初步鉴定。

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