常用消毒剂对非洲猪瘟病毒核酸的影响

2.2 各消毒剂与ASFV 不同作用时间结果

各消毒剂在选定稀释度下与原始病料样品1.7×104copies的ASFV 分别作用5、10、20、30 和40min 后，采用微滴式数字PCR 进行检测。处理样品平行检测3 次，各组平均阳性微滴数批间变异系数为0.36%～5.42%；取同一批次样品平行提取核酸3 次进行检测，各组平均阳性微滴数批内变异系数为0.17%～2.26%。结果显示戊二醛与ASFV 作用时间不同，对病毒的核酸降解量变化最大。其他种类消毒剂对ASFV 核酸降解量并未随着时间的延长而有明显增加(图1）。

图1 消毒剂与ASFV 不同作用时间病毒拷贝数

2.3 各消毒剂与ASFV 作用温度结果

各消毒剂在选定稀释度下与原始病料样品1.7×104copies的ASFV 分别在4、25 和35℃条件下作用30min 后，采用微滴式数字PCR 进行检测。处理样品平行检测3 次，各组平均阳性微滴数批间变异系数为0.32%～5.39%；取同一批次样品平行提取核酸3 次进行检测，各组平均阳性微滴数批内变异系数为0.20%～2.47%。结果显示过硫酸氢钾和戊二醛癸甲溴铵与ASFV 作用在温度较高时，消毒剂对核酸的降解量增加较明显。其他种类消毒剂对ASFV 核酸降解量并未随着环境温度的变化而有明显变化 (图2）。

图2 消毒剂与ASFV 不同作用温度病毒拷贝数

3、讨论

ASFV 严重危害猪只健康，且目前尚无商品化疫苗。消毒是控制病毒感染的重要环节，ASFV 对戊二醛、含氯、含碘类等多数常用消毒剂敏感。通常，病毒分离方法最能直观显示消毒剂对病毒的杀灭效果，但该方法只能在农业部指定实验室中开展，且检测周期长、操作繁琐，不适用于快速监测。而ELISA 和胶体金等检测方法敏感性较低，达不到对消毒效果评价要求。数字PCR 方法可对病原含量进行定量，且灵敏度高于荧光定量PCR 方法。

该研究通过微滴式数字PCR 检测结果显示，含氯类中二氯异氰尿酸钠、醛类中戊二醛、过氧化物中过硫酸氢钾3类消毒剂与ASFV 作用后，对数字PCR 检测结果影响最显著，病毒核酸含量明显下降。有研究显示，二氯异氰尿酸钠与水作用后可产生次氯酸，引起蛋白变性从而改变膜的通透性，同时也能影响DNA 合成等来杀灭病原。但该研究中另一含氯类消毒产品，与ASFV 作用后，对病毒核酸影响很小。因此不同含氯类消毒剂对病毒核酸影响差异的原因，需进一步研究分析。戊二醛类消毒剂，能够凝固蛋白质中的氨基和羧基导致病原微生物蛋白变性使其死亡。本研究发现戊二醛有显著的核酸降解能力，而戊二醛癸甲溴铵对核酸的降解能力较弱，且季铵盐类消毒剂癸甲溴铵与ASFV 作用后，核酸含量无明显变化，推测可能癸甲溴铵不仅不具有核酸降解能力，而且会抑制戊二醛对病毒核酸的降解能力。

4、结论

综上所述，二氯异氰尿酸钠、戊二醛、过硫酸氢钾这3种消毒剂相对于其他消毒剂对病毒核酸降解量最大；戊二醛与非洲猪瘟病毒作用时间不同，对病毒的核酸降解量变化最大；环境温度对过硫酸氢钾和戊二醛癸甲溴铵的非洲猪瘟病毒核酸降解能力影响最大，温度较高时，核酸降解能力增强。提示了养殖场如若消除病毒核酸污染，可选择二氯异氰尿酸钠、戊二醛、过硫酸氢钾这3 种消毒剂，且在使用过程中，戊二醛尽可能增加消毒作用时间，过硫酸氢钾适当提高消毒作用温度，来加强病毒核酸降解能力。

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