奶牛布病免疫抗体与自然感染抗体鉴别诊断的探索

2）试验方法 ①虎红平板凝集试验参照GB/T 18646—2018动物布鲁氏菌病诊断技术中4.4操作；②试管凝集试验参照GB/T 18646—2018动物布鲁氏菌病诊断技术中4.6操作；③竞争酶联免疫吸附试验（cELISA）参照GB/T 18646—2018动物布鲁氏菌病诊断技术中4.9操作；④布鲁氏菌抗体琼扩（AGID）试验参照2.2之2）操作；⑤荧光偏振试验参照试剂盒说明书操作。试验步骤：移取20μL阴阳对照和样品到玻璃管/深孔条的所有管或孔中。将阴性对照一式三份、一份阳性对照和待检样品分别加入玻璃管/深孔条的所有管或孔中。移取1mL样品稀释剂到10×75mm玻璃管中。仔细混合；室温下孵育2～5min。获取所有样品和对照的空白读数。在含有对照和样品的所有管中加入10μL示踪剂，仔细混合。在室温下孵育2～5min。获得所有样品和对照的mP读数；结果判定：ΔmP≤10判为阴性，ΔmP介于10～20判为可疑，ΔmP＞20判为阳性（ΔmP=样品mP值-阴性对照平均mP值)。阳性和可疑样品必须重新检测两次，如果两次重检的结果都是ΔmP≤10，则判定为阴性，如果两次重检中有任何一次结果ΔmP＞10，则判定为阳性。疫苗免疫区或部分高风险区，由于环境和流行病学的存在，建议采用如下截断值：ΔmP≤40判为阴性。ΔmP介于40～60判为可疑，ΔmP＞60判为阳性。

3）试验结果 对虎红平板凝集试验、试管凝集试验均为阳性的25份样品进行鉴别试验，结果见表6。

对照临床症状，对比几种试验得出：①琼脂扩散试验除1份外均为阳性；②竞争ELISA试验与试管凝集符合率80%，出现临床症状的样品竞争ELISA均为阳性；③琼脂扩散试验与临床症状符合率96%；④荧光偏振试验与临床症状阳性符合率100%。样品mP的值在150～180之间，阳性率达到98%，荧光偏振总体符合率60%，荧光偏振试验受免疫影响出现非感染性阳性的现象。

首页前一页1234后一页尾页