常见猪病毒性疾病及其检测方法研究进展

3）恒温扩增技术。环介导恒温扩增技术（LAMP）是一种本世纪兴起的新型核酸扩增方法，被广泛应用于多种病毒的检测。该法具有快速简便、高灵敏度、高特异性等特点，被基层单位大量使用。文献[20]建立了PEDV的LAMP检测法，该法在62℃水浴40min即可完成实验，结果显示该法可检测的RNA量可低至10pg，且不会发生其它常见猪病毒核酸的扩增反应，特异性较好。文献利用LAMP原理建立了一个快速且能定量的Real-time RT-LAMP法，通过扩增JEV的包膜E蛋白基因来定量检测JEV，将检测时间缩短至1h，检测下限为1PFU，其敏感性与常规RT-PCR相似。文献[22]建立了PRRSV的环介导逆转录等温检测方法，该方法灵敏度比荧光定量PCR高100倍，全部反应可在1h内完成，且PCV、CSFV、PRV的扩增结果均为阴性。

重组酶介导等温扩增技术（recombinase aided amplification，RAA）是新兴的已申请我国专利的一种等温检测方法，其利用重组酶、单链结合蛋白、DNA聚合酶在37℃等温条件下（最适温度）进行核酸扩增的一种技术。文献[23]基于非洲猪瘟病毒保守基因B646L（P72）序列，设计特异性引物、探针，建立ASFV RAA-重组酶介导等温核酸扩增检测法，检测时间仅需10min，且与口蹄疫病毒（FMDV）、伪狂犬病病毒（PRV）、猪细小病毒（PPV）等均无交叉反应，与WOAH推荐的荧光定量PCR检测结果一致。

4）基因芯片技术。基因芯片技术是利用核酸分子杂交配对的特性建立起来的一种高效、特异、灵敏、快速的基因分析技术，可在一个芯片中实现数个样品、多种病原体的同时检测。把PCR扩增技术和基因芯片检测技术相结合，通过PCR的扩增作用及基因芯片的杂交技术，实现两者的优势互补，从而达到较高的灵敏度。文献利用基因芯片技术和多重PCR技术建立了同时检测猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪细小病毒、乙脑病毒及猪圆环病毒2型这5种病毒，该方法特异性强、稳定性好，灵敏度可达102copies/μL。文献[26]建立了可同步检测10种猪常见疫病病毒（PRRSV、PRV、CSFV、PCV2、 SIV、PEDV、TGEV、PPV、FMDV和PCMV）的基因芯片检测技术，应用其对1,006份样品进行符合检测，结果显示，该方法快速便捷、灵敏度高、特异性好，最低检测限可达105copies/μL，与普通PCR/RT-PCR的检测符合率达到96.76%以上。

3 展望

虽然目前我国在控制猪疾病方面有了很大的发展，但仍不断有新的病毒性疾病出现，从而严重危害生猪养殖业。针对猪病毒性疾病的快速、准确诊断就显得尤为重要，其中分子生物学检测以其快速、准确、简便等优势越来越成为最常见的检测手段。而多重检测则可同时检测多种病毒从而可更好地防控病毒性疾病，降低猪发病率，保障养猪业从业者的利益，降低因病毒的传播导致的损失。

随着生物检测技术的不断革新，笔者推测，未来猪病毒性疾病的诊断技术会逐步往微型化、集成化及大数据分析的方向发展，可为我国猪养殖行业提供更好的技术支撑，促进该行业又好又快的发展，进一步夯实全社会食品安全基础。

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