禽星状病毒研究进展

DAstV 感染初期表现厌食、精神不佳，继而转为神经症状，表现运动失调、角弓反张，剖检可见肝脏、肾脏等肿大，有出血性病变等。GoAstV 感染则以痛风、肾脏肿大和出血为主要症状。但是，人们对于 DAstV和 GoAstV 的致病机制仍缺乏相关了解。火鸡感染星状病毒后，主要表现为腹泻，但研究发现星状病毒并非因破坏肠上皮细胞或引发炎症而导致腹泻。目前，认为 TAstV 感染火鸡并引发腹泻的方式有三种：一是 TAstV 感染诱导钠吸收不良而腹泻；二是 TAstV 感染导致糖消化吸收障碍而腹泻；三是因为 TAstV 衣壳蛋白是一种肠毒素，可改变肠道屏障通透性和肠上皮细胞分布，进而引发腹泻。此外，研究表明，火鸡感染星状病毒后，自身免疫抑制因子 TGF-β 活 性得到增强，从而抑制了机体的炎症反应。 

4、检测方法

4.1 电镜检测

电镜已被普及应用于某些动物病毒快速检测当中。尤其是在一些新发现的病毒检测中，该技术的优势更加突出。因为星状病毒特有的五角或六角星状特征，所以研究人员通过电镜从下痢的火鸡肠 道中发现了星状病毒粒子。此后一段时间内，电镜成为检测星状病毒的主要手段。但是电镜检测过分依赖病毒特征，直接观察准确性低，适用于单个或少量样品。

4.2 酶联免疫吸附试验（ELISA）

ELISA 方法是一种免疫测定方法，利用抗原抗体结合对免疫反应进行定性或者定量分析。Herrmand 等成功制备星状病毒单抗，并建立EIA 和 ELISA 方法。荷兰 BioChek 公司研制出针 对 CAstV B 群的 ELISA 抗体检测试剂盒。Tang 等利用 ELISA 方法对两种血清型的 TAstV 进行了交叉反应，证实了不同血清型的 TAstV 具有相同 的抗原。Wang 等在大肠杆菌中表达了 DAstV的 ORF2 蛋 白 c 端， 构建了间接 ELISA 方法。Tang 等建立了多克隆 AC-ELISA 和单克隆 ACELISA，前者具有更高的灵敏度和更宽的检测谱， 后者特异性较高，但是灵敏度较低。Skibinska等开发了用于检测鸡血清  CAstV 的间接ELISA 方法。

4.3 细胞培养和病毒分离

病毒分离培养是病毒研究中重要的一个环节， 对毒株感染机制和发病机理等的深入研究以及疾病 防治、疫苗和药物研究有重要意义。鸡胚或鸭胚接种、细胞培养是常用的病毒增殖方法。AAstV 不 易在体外复制，目前使用鸡胚肾细胞（CEK）或鸡 肝癌细胞系（LMH）可以实现 AAstV 的分离，但是病毒增殖效率较低。Wei 等利用 LMH 细胞， 从商品鸭中分离到新型 GoAstV。Nunez 等通过卵黄囊接种 SPF 鸡胚，分离到 CAstV 和 ANV。Liu 等将鸭组织样品接种到鸭胚的绒毛尿囊膜中，成功分离到 DAstV-CPH 株。Zhang 等通过鹅胚绒毛尿囊膜接种方式，从 1 个养鹅场中分离到AAstV SD01 株。Patel 等通过接种 SPF 鸡胚尿 囊腔，从印度受感染的肉鸡中分离到 CAstV。

4.4 分子技术检测方法

分子技术检测方法是目 应用范围最广、最普遍的方法，最常用的有 RT-PCR、荧光定量 PCR以及环介导等温扩增（LAMP）等。Wan 等根据 RdRp 序列建立了针对新型 GoAstV 的 TaqManRT-qPCR 方法。Yin 等针对新型 GoAstV ORF2区域设计新型 GoAstV 的检测引物和 TaqMan 探针。Jindal 等针对禽轮状病毒 NSP4 基因、TAstV-2聚合酶基因和禽呼肠孤病毒 S4 保守区域建立了多 重 RT-PCR 方 法。Day 等建立了用于鉴别TAstV-1、TAstV-2、CAstV、ANV 和禽轮状病毒的多重 RT-PCR。Smyth 等建立了用于检测 ANV和 CAstV 的 实 时 TaqMan RT-qPCR方法。He 等 针 对 新 型 GoAstV ORF1a 基因开发了一种 定 量 LAMP 方法。Yu 等建立了针对 GAstV 的 ORF2基因的 RT-LAMP 方法。Ji 等针对新型 GoAstVORF1b 基因建立了一种 RT-LAMP 方法。此外，考虑到试验过程中操作误差、核酸提取后抑制物残留等问题，徐蕾蕊等致力于研发星状病毒核酸检测标准物质，以期望保证检测结果的可靠性和核酸扩增检测的质量。 

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