qPCR常见问题及解决方案（图）

1）反应体系污染，结合NTC和NRC结果确认污染情况，建议从水，引物，酶和环境等逐一排除污染。

2）试剂暴露在强光或高温下导致试剂失效，建议用新的试剂做对比实验。

3）仪器长时间未校准，建议定期进行仪器校准保养。

4）耗材与仪器不匹配，需确认对应仪器对耗材的要求。

5.有扩增曲线，无熔解曲线

可能是熔解程序设置错误，未搜集荧光信号，建议重新实验，增加熔解曲线阶段的信号搜集。

6.两种试剂平行对比，同一产物Tm值不同

可能是不同试剂的促解链成分或含量不一样，导致同一产物解链温度Tm值不一样。

7.熔解曲线前端起杂峰

可能是ROX浓度与机型不匹配，建议取消ROX校正查看熔解曲线是否正常，调整后如下图。

【注】可以在仪器上将参比染料设置由ROX更改为NONE，取消ROX的校正功能，查看熔解曲线是否恢复正常，即可判定是否是ROX导致的。

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