湖南省永州市鸡感染 H7N9 流感病毒变异株的调查

禽流感（Avian influenza，AI）是由流感病毒引起的禽类感染或疾病综合征。流感病毒属于RNA 病毒的正黏病毒科，其最显著的生物学特性是亚型众多、变异频繁。其分子机制涉及点突变引起的抗原漂移（Antigenic drift）和不同亚型毒株同源重组产生新亚型所引起的抗原转变（Antigenicshift）[1]。流感病毒根据两个蛋白抗原性的不同，可被分为 16 个 HA 亚型（H1~H16） 和 9 个 NA亚型（N1~N9），理论上流感病毒可组成 144 个亚型 [2]。高致病性禽流感病毒目前仅见于 H5、H7两个亚型。它们从水禽传给陆禽，经过几代传播以后，从低致病性演变成高致病性病毒。关于 H7N9流感病毒变异株分子特征、人感染后的临床症状已有报道 [3]，但未见禽感染 H7N9 流感病毒变异株临床特征的报道。因此，研究禽感染 H7N9 流感病毒变异株的临床特征及变异株的来源，对重大动物疫病防控是有意义的。

1　材料与方法

1.1 病例来源

发病鸡来自湖南省永州市东安县端桥铺镇某一起鸡感染 H7N9 流感病毒变异株的调查养禽场。该禽场存栏蛋鸡 6 000 余羽，品种为海兰灰，320 日龄。至发病第 4 日，累计死亡 102 羽。分别随机采集 8 只发病鸡的咽 / 肛拭子及血液样品，备用。

1.2　流行病学调查

向养殖户、饲养员、防疫技术员询问关于鸡发病的相关信息，并对饲料、用药进行取证调查。

1.3　病理解剖

随机选择 8 只发病鸡进行临床解剖，对发病鸡的气管、心脏、肝脏、肾脏等器官进行病理解剖并拍照，做好记录。

1.4　实验室检测

1.4.1　检测试剂。禽流感病毒 H5（Re-6 株）、H7 亚型血凝抑制试验抗原（哈尔滨维科生物技术开发公司出品，批号 201605）；禽流感病毒 H5/H7/H9 型实时荧光 RT-PCR 检测试剂盒（深圳生科源生物科技有限公司产品，批号 201506）。

1.4.2　检测方法。关于禽流感病原学检测，按禽流感病毒荧光 RT-PCR 检测方法（GB/T 19438.1—2004）。从样品中提取病毒 RNA 后，以实时荧光定量反转录 - 聚合酶链反应法（real-time RT-PCR）检测 H5/H7/H9 亚型核酸。关于禽流感抗体检测，按高致病性禽流感诊断技术（GB/T 18936—2003）进行血凝和血凝抑制试验，并记录相关数据。

1.4.3　数据处理。将有关数据录入 Excel 2003软件，通过 SPSS 13. 0 软件进行统计分析，使用GraphPad Prism 5 软件制图。

2　结果与分析

2.1　流行病调查结果

发病前 100 d，养鸡场实施过 H5 亚型流感疫苗和“H5+H9”联苗（广东永顺）免疫，饲养状况良好，并无其他烈性发病情况。发病后的前 4 天，分别死亡 10、18、31、102 羽（图 1）；死亡的前几天，病鸡采食量、产蛋量无明显变化，外观正常；至濒死日，呈现明显的外观症状：精神萎靡、头部肿大、肉髯发绀、流泪、口流涎（图 2），也有部分鸡在采食过程中突然死亡。由于鸡发病迅猛，死亡快，无脚趾出血症状。

图 1　发病禽场日死亡数量

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