qPCR常见问题及解决方案（图）

可能是ROX浓度和机型不匹配，建议调整ROX浓度，调整后见下图。

【注】可以在仪器上将参比染料设置由ROX更改为NONE，取消ROX的校正功能，查看扩增曲线是否恢复正常，即可判定是否是ROX导致的。

6.有熔解曲线，无扩增曲线

可能是扩增程序设置错误，未进行荧光信号搜集，建议重新实验，增加扩增程序中延伸阶段荧光信号的搜集。

7.扩增曲线有向上或向下的尖峰

可能是仪器故障，建议维修仪器。

8. 阴性对照有扩增

1）NTC有扩增，可能有以下两种情况：

①Ct＞35，熔解曲线Tm值＜80℃（一般正常qPCR产物，大小在100-300bp之间，熔解曲线Tm大多在80℃以上），可能是引物二聚体导致，可进一步优化引物。

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