猪群进行猪伪狂犬病净化后病毒gE抗体的检测与分析

摘要：为了解猪伪狂犬病在规模化猪场的净化效果，采用ELISA对规模化猪场血清检测样品中猪伪狂犬病病毒gE抗体的水平进行判定。结果显示：净化前，3个规模化猪场共检测34份血清样品，其中猪伪狂犬病病毒gE抗体阳性3份，抗体阳性率达8.8％。采取净化措施后，3个猪场共检测34份血清样品，未检出猪伪狂犬病病毒gE阳性抗体，净化措施取得明显的效果。

猪伪狂犬病是目前影响我国养猪生产的主要传染病之一，近年来，通过加强免疫接种及生物安全措施，猪伪狂犬病的发生和流行得到了有效控制，发病率和死亡率明显降低。该病在成年猪上一般为隐性感染，但可导致繁殖障碍，给猪场造成一定的经济损失，采取净化措施，可以根除隐性感染猪，提高猪场的经济效益。

１  材料与方法

1.1 仪器与试剂

全自动酶标分析仪(北京普朗新技术有限公司，型号DNM9602)。

猪伪狂犬病病毒gE抗体检测试剂盒(上海博研生物科技公司，批号20210311)。

1.2 血样采集与处理

选择3家规模化猪场作为试验猪场，随机选取34头猪作为备检猪，耳静脉或前腔静脉采血2 mL，不加抗凝剂，血液自然凝固，待血清析出后，分离血清，留待检测。

1.3 检测方法

采用ELISA检测。首先在酶标反应板每孔加样品稀释液40 μL，然后加血清10 μL，用封板膜封板后置37 ℃孵育30 min，用洗涤液洗板5次，加入酶标试剂50 μL，继续孵育30 min，洗板后每孔先加入显色剂A、B各50 μL，37 ℃避光显色15 min，每孔加终止液50 μL终止反应。以空白孔调零，450 nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。为了准确判定结果，设阴性对照、阳性对照。

1.4 净化方案

在执行生物安全措施的基础上，猪群按免疫程序进行免疫，一个月后检测疫苗抗体效价，出现阴性的，重新免疫，若疫苗抗体阳性，抗体水平合格，再进行猪伪狂犬病病毒gE抗体检测。如果gE抗体阳性，淘汰猪，如果gE抗体阴性，则无猪伪狂犬病野毒感染，建立健康示范群。

2  结果与分析

2.1 猪伪狂犬病净化gE前抗体检测结果

3家猪场共采集34份血清样品，采用ELISA检测猪伪狂犬病病毒gE抗体，1号猪场阳性数1个，抗体阳性率8.3％，2号猪场阳性数2个，抗体阳性率16.67％，3号猪场阳性数0个，平均阳性率为8.82％(表1)。

2.2 猪伪狂犬病净化后gE抗体检测结果

3家猪场共采集34份血清样品，采用ELISA检测猪伪狂犬病病毒gE抗体，阳性率为0(表2)。

2.3 分析与讨论

(1) 猪伪狂犬病病毒免疫抗体检测不能区分人工免疫与自然感染，由于gE基因是猪伪狂犬病病毒的主要致病性基因，通过分支生物学技术，研发出gE基因缺失苗，猪接种该疫苗后，产生缺失基因的抗体，猪伪狂犬病病毒gE抗体的血清学检测很容易区分疫苗株与野毒株感染。

(2) 通过gE抗体检测，淘汰处理阳性猪，消除传染源，从根本上净化猪伪狂犬病，实际净化效果表明，这一方法是可行的。

(3) 加强免疫是关键：猪群全部使用猪伪狂犬病病毒 Bartha-K61株gE基因缺失弱毒疫苗免疫，同时结合抗体检测等结果，进一步调整免疫程序。

(4) ELISA技术具有特异性强、敏感、检测快速、适合群体检测等优点，在猪伪狂犬病病毒净化中，有很好的实用性。