我国部分地区Sicinivirus流行病学调查

1.3 引物合成

检测引物参考 Zhou 等扩增 Sicinivirus 编码 3D 蛋白保守区 cDNA 所设计的 1 对引物 S8F 和S8R，用于扩增 652 bp 的 3D 基因片段。上游引物：5'-GCTCTATTTCTCGCGTTGCAAT； 下 游引物：5'-GCCTCCCTTCATGATGTACCAC。引物由上海生工生物工程技术服务公司合成。

1.4　样品 PCR 检测和测序鉴定

取出 -80 ℃保存的双拭子，待解冻后，室温下 10 000 r/min 离心 5 min。每个样品取 200 μL 上清液加入 96 孔加样槽中，使用 QIAxtractor 高通量核酸提取仪及其配套试剂盒提取病毒 RNA，将提取的核酸 -80 ℃保存备用。利用 HiScript II OneStep RT-PCR Kit 试剂盒，对提取的病毒 RNA 进行RT-PCR 扩增。扩增程序：50 ℃ 30 min；95 ℃2 min；95 ℃ 30 s，51 ℃ 30 s，72 ℃ 45 s，40 个循环；72 ℃ 5 min。

PCR 产物经电泳、纯化回收后，由上海生工生物工程公司测序；利用 DNAstar 软件中的Seqman 程序对所测序列拼接，然后对拼接结果进行 BLAST 比对，比对结果为 Sicinivirus 的判为阳性样品。

1.5 　数据统计

对 PCR 检测及测序 结 果，利用 IBM SPSSStatistics 22 软件进行统计分析，计数资料采用 χ2检验，以 P = 0.01 作为检验水准，分析不同地区、不同宿主、不同场点的个体阳性率。

2　结果与分析

2.1　不同地区

PCR 检测结果显示：在 25 个场点中 13 个为阳性，1 920 份样品中，共检出 134 份为 Sicinivirus阳性，个体阳性率为 6.97%（134/1 920），其中河北、湖北、上海、广东、江苏、江西、广西和安徽的个体阳性率分别为 24.16%（58/240）、10.83%（26/240）、5.83%（14/240）、5.41%（13/240）、4.16%（10/240）、2.50%（6/240）、1.66%（4/240）和 1.25%（3/240），不同地区个体阳性率差异显著（df = 7，χ2= 121.800，P ＜ 0.01）。

2.2　不同宿主

在 1 920 份样品中，共检出 134 份阳性样品，其中 132 份的宿主为鸡、1 份为鹅、1 份为鸽，鸭和鹧鸪中未检测到 Sicinivirus，鸡、鹅和鸽的个体阳性率分别为 10.81%（132/1 221）、2.44%（1/41）和 0.42%（1/235），表明鸡为 Sicinivirus 的主要易感宿主（P ＜ 0.01）。

2.3　不同养殖类型

不同养殖类型检测结果显示，农贸市场、批发市场和屠宰场的个体阳性率分别为3.00%（18/600）、6.23%（58/930） 和 24.16%（58/240）， 在 150 份养殖场采集的样品中没有检出 Sicinivirus。不同场点类型阳性率之间的差异任意期望频率均大于 5，采用 Pearson 卡方检验，显示不同类型场点的阳性率差异显著（df = 4，χ2= 138.169，P ＜ 0.01），屠宰场为最易感场点。

3　讨论

本研究首次在我国开展 Sicinivirus 流行病学调查。本研究采取的方法为配额抽样的非随机抽样方法，可能会出现选择性偏倚和一定的局限。

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