山东省部分养殖场点马属动物主要病毒疫病调查

摘要：为了解山东省马属动物主要病毒疫病流行现状，采集青岛市2个马场以及济南、聊城和德州等驴养殖密集地市4个驴场的血清和全血样品各694份，分别进行马传染性贫血、H3N8亚型马流感血清抗体检测和非洲马瘟病原检测。结果显示：马传染性贫血、非洲马瘟检测全部为阴性，H3N8亚型马流感群体阳性率和样品阳性率分别为100%（6/6）和81.38%（520/639）。结果表明：马传染性贫血和非洲马瘟在这些养殖场点已得到很好的预防，但鉴于国外严峻的疫情形势，需要继续加强监测，防止病原传入；H3N8亚型马流感流行较为普遍，感染率较高，需要重点加强防控。本调查为山东省马属动物疫病防控提供了数据参考。

马属动物主要由家马、驴、骡和斑马组成。我国养马历史悠久，长期以来，马是重要的畜力和交通工具。随着经济社会的发展，近年来马的传统役用和交通功能被机械逐步取代，养殖量逐渐减少，而与马产业紧密相关的体育运动、休闲骑乘、文化旅游、专业化马产品开发等新业态开始蓬勃发展。驴产业是我国畜牧业中的重要产业之一。近年来驴役用价值也在不断萎缩，而其商用价值快速上升，驴皮、驴肉等产品的市场需求快速增长，尤其是阿胶产品给驴产业带来了新的活力。山东省是养驴大省，规模化驴场超过 200 个，存栏量超过100 万头。

马传染性贫血（equine infectious anemia，EIA），简称马传贫，是由反转录病毒科慢病毒属马传贫病毒引起的一种持续感染性疫病，可以感染马、驴、骡等马属动物，临床症状主要为发热、贫血、黄疸、浮肿和消瘦。世界动物卫生组织（OIE）将其列为须通报动物疫病，我国将其列为二类动物疫病。非洲马瘟（African horse sickness，AHS），是由非洲马瘟病毒引起的一种急性或亚急性传染病，主要表现为呼吸困难、体温升高，病死率可达 95%，OIE 将其列为须通报动物疫病，我国将其列为一类动物疫病。马流行性感冒（equineinfl uenza，EI），简称马流感，是由正黏病毒科流感病毒属马 A 型流感病毒引起的一种病毒性呼吸道传染病，马、驴、骡等马属动物对其均易感，主要表现为发烧、咳嗽、流鼻液和母畜流产，目前以H3N8 亚型为主，OIE 将其列为须通报动物疫病，我国将其列为三类动物疫病。为了解山东省马属动物中上述 3 种病毒疫病的流行状况，2020 年对山东省部分马属动物养殖场进行了病原或抗体检测，以期为山东省马属动物疫病防控提供技术支撑。

1　材料与方法

1.1　样品

2020 年 11 月，选择马属动物养殖比较密集的济南、青岛、聊城和德州等地市的养殖场，场群内按照发现疫病的策略进行抽样，设置信区间 95%、试验敏感性 100%、预期流行率 2%。在青岛市的 2个马场（每场存栏约 100 匹），每场随机采 75 匹马的血清和全血样品，共采集马血清和全血样品各150 份；在驴存栏数量较多的济南、聊城和德州等地市，选择存栏约 1 000 头的 4 个场点，每个场点随机选择 136 只，同时采集血清和全血样品，共采集驴血清和全血样品各 544 份。

1.2 试剂

H3N8 亚型 EI 血凝抗原、EIA 抗体 ELISA 检测试剂盒、AHS 病原荧光 PCR 检测试剂盒，均由动物用生物制品国家工程研究中心提供；核酸提取试剂盒，由 Roche 公司提供；0.016 mol/L 的过碘酸钾，由本实验室配制。

1.3　检测与结果判定

1.3.1 EIA 采用 ELISA 方法检测抗体，按照试剂盒说明书进行。检测为阳性，判定该份样品为阳性，有 1 份及以上阳性样品的场，判定为阳性场。

1.3.2 AHS 采用荧光 PCR 方法进行病原检测。将全血样品，采用核酸提取试剂盒提取核酸，然后用AHS病原荧光PCR检测试剂盒进行扩增和检测。检测为阳性，判定该份样品为阳性，有 1 份及以上阳性样品的场，判定为阳性场。

1.3.3 H3N8 亚型 EI 采用 HI 方法进行 H3N8 亚型抗体检测。向待检血清中加入 2 倍体积新配制的0.016 mol/L 过碘酸钾溶液，置于（22±2）℃作用15 min；之后加入与血清等体积的含 3% 甘油的 PBS，以中和过剩的过碘酸溶液，混合后置于（22 ±2）℃作用 15 min；最后，在 56 ℃水浴中灭活 30 min，采用 1% 鸡红细胞进行 HI 试验。被检样品 HI 效价≤ 3log2，判为阴性；HI 效价 = 4log2，判为可疑，进行重检，若重检效价≥ 4log2，判为阳性，≤ 3log2，判为阴性；HI 效价≥ 5log2，判为阳性。有1份及以上阳性样品的场，判定为阳性场。

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