几种布鲁氏菌病检测方法比对结果分析

2.1　国标方法对血清样品检测

4 种国标方法检测出的阳性样品数量有较大差距。虎红平板凝集试验检出阳性样品 16 份，阳性率为 40.0%；试管凝集试验检出阳性样品 6 份，阳性率为 15.0%；cELISA 和 iELISA 方法分别检出阳性样品 33 和 23 份，阳性率分别为 82.5% 和57.5%。其中，试管凝集试验检测的阳性血清（样品 1~6 号），经其他 3 种国标方法检测也为阳性。

2.2　胶体金试纸条检测

胶体金试纸条共检出 9 份阳性血清（样品1~9 号），阳性率略高于试管凝集试验。其中，样品 1~4 号被所有血清学检测方法判定为阳性，样品 5~7 号被胶体金试纸条以外的 4 种血清学方法判定为阳性，样品 8、9 号被虎红平板凝集试验、iELISA 和 cELISA 3 种血清学方法判定为阳性。在牛奶样品检测中，胶体金试纸条检测出 10 份阳性样品，与同方法的血清学结果基本一致。对于所有经虎红平板凝集、试管凝集试验检测为强阳性的样品以及经琼扩法判定为野毒感染的试验牛，其奶样经胶体金试纸条检测也均呈阳性。

2.3 琼扩法检测

琼扩法检测结果显示，有 12 份阳性血清，其中 7 份是免疫阳性，5 份为野毒感染。没有出现琼扩法单一检测为阳性的血清样品。琼扩法检测为野毒阳性的样品中，除 1 份样品为 iELISA 阴性外，其他均被所有血清学方法证实。当琼扩法检测出现野毒抗体沉淀线时，可认为该样品存在野毒感染。

但琼扩法在具有高度特异性的同时，也损失了一定的敏感性，尤其是在读取结果时，经常发现沉淀线不够清晰或者培养 48 h 后才能够勉强观察到沉淀现象。在本次检测中，有 3 份琼扩法检测为阴性的样品（样品 6、8、9 号）被其他多种方法却认定为阳性。

2.4　病原学检测

2.4.1 BSSP qPCR 标准曲线建立　目标基因插入pUC57 质粒。以 3.47×108 拷贝 /μL 进行 10 倍梯度稀释，获得标准曲线方程 Y = -3.12X+45.5，R² = 0.991 2（图 1），具有良好的线性关系。

图 1 BSPP 标准曲线

2.4.2 BA qPCR 标准曲线建立　目标基因插入pUC57 质 粒。 以 6.34×108 拷 贝 /μL 进 行 10 倍梯度稀释，获得标准曲线方程 Y = -3.43X+32.4，R² = 0.997 3（图 2），具有良好的线性关系。

图 2 BA 标准曲线

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