动物源性食品中有害化学物质及污染物的检测——三聚氰胺

5.2 固相萃取（SPE）技术

SPE是一种基于液相色谱分离机制的样品净化技术，其原理是利用固体吸附剂进行萃取，将液体样品通过填充固体吸附剂的萃取柱，目标物和杂质被吸附而保留在柱上，用选择性溶剂去除杂质，然后再用洗脱液洗脱或加热解吸附，从而达到分离和富集目标化合物的目的。

三聚氰胺是一种弱碱性的化合物，在酸性溶液中可电解为正离子，所以通常用阳离子交换SPE柱（如强阳离子交换、混合模式阳离子交换、聚苯乙烯阳离子交换）进行样品纯化以去除中性和酸性干扰物。目前采用SPE柱在各种基质中选择性提取和浓缩三聚氰胺最为广泛，如SCX-C18混合填料反相色谱柱、Waters Oasis MCX柱和Strata-X-C柱等。蔡勤仁等建立了猪组织中三聚氰胺、三聚氰酸、三聚氰酸一酰胺、三聚氰酸二酰胺及环丙氨嗪的LC-MS/MS检测方法。比较了MCXSPE柱和石墨化碳黑柱的净化效果，结果表明，Sepucol石墨化碳黑柱对5种三聚氰胺类化合物的回收率均能满足要求，MCXSPE柱对环丙氨嗪、三聚氰胺和三聚氰酸二酰胺的回收率最高，但对三聚氰酸和三聚氰酸一酰胺几乎无保留。

洗涤液和洗脱液的种类及应用顺序也会影响三聚氰胺的检测。理论上，对于三聚氰胺的纯化，样品应先用酸性的水溶液洗涤，然后再用甲醇洗脱，这是因为酸性条件有利于三聚氰胺和阳离子基团结合。

虽然SPE具有高效、快速、简便、溶剂耗费少等优点，但在处理大量样品时，仍是一项耗时、耗力的工作。在实际应用时，通常将SPE与其他分析技术联机自动操作，如SPE-HPLC、SPE-LC-MS、SPE-LC-MS/MS等。

5.3 基质分散固相萃取技术

基质分散固相萃取是Anastassiades等提出的快速前处理方法，能将样品的提取、净化一步完成，省去了氮吹过程，避免了传统的SPE方法中样品因淋洗、洗脱、转溶、乳化、浓缩造成的待测组分的损失。与传统残留检测方法相比，该净化方法具有回收率高、稳定、简便、快速、经济、环保等优点。

杨玉秀等针对水产品脂肪和蛋白质含量高，成分复杂，含有色素、糖类、有机酸等，采用DSPE的净化方法，较好地去除样品中的杂质，并比较了石墨化碳黑、中性氧化铝和乙二胺-N-丙基硅烷（PSA）3种净化材料。结果表明，石墨化碳黑可有效去除杂质，但对三聚氰胺也有很强的吸附作用，不适合用于水产品中三聚氰胺的净化；中性氧化铝粒径小、表面积大、吸附性强，对水产品中的蛋白质和脂肪有较好的吸附作用，能有效去除干扰成分；PSA含有伯胺和仲胺基团，具有弱的阴离子交换能力，对水产品中有机酸、色素、糖类等均有良好的保留作用。通过试验，选择100mg中性氧化铝与50mgPSA混合使用，其净化效果更佳。

5.4 分子印迹技术（MIT）

MIT是利用具有分子识别功能的分子印迹聚合物（MIP）的一种识别技术，具有类似于抗体的高选择性、高特异性和高柔韧性等优点，适合作为SPE填料或分子印迹薄膜来分离富集目标化合物，达到样品分离纯化的目的。

目前，使用MIP作为固相吸附剂来特异性提取三聚氰胺的研究还比较少。Li等利用环丙三氨三嗪为模板分子，采用甲基丙烯酸、二甲基丙烯酸乙二醇酯和乙腈分别作为功能单体、交联剂和致孔剂来制备特异性识别三聚氰胺的MIP。该聚合物对三聚氰胺最大结合浓度为53.2mmol/mg，将其作为SPE吸附剂提取样品中的三聚氰胺，建立了牛奶和饲料中三聚氰胺的MIT-GC-MS分析方法，其检测限为0.01μg/g，定量限为0.05μ/g，样品添加回收率为93.1%~101.3%。

牛计伟等以三聚氰胺为模板分子，采用沉淀聚合法制备了高选择性和强吸附容量的三聚氰胺的MIP，将其作为SPE吸附剂，与HPLC联用检测奶粉样品中残留的痕量三聚氰胺。结果，萃取回收率为85.1%~99.7%，SPE过程可以避免繁琐的样品浓缩过程，缩短了样品前处理时间，降低了二次污染，可实现大体积样品提取液的直接净化和富集，从而降低了整个检测方法的检出限。

贺利民等以环丙氨嗪为虚拟模板分子、甲基丙烯酸为功能单体、乙二醇二甲基丙烯酸酯为交联剂，采用本体聚合法合成了对三聚氰胺具有良好识别能力的MIP，将其制备成SPE小柱，可有效分离、净化和富集鸡蛋中的三聚氰胺，并结合GC-MS技术测定鸡蛋中的三聚氰胺，方法检出限为10μg/kg，平均回收率为82.8%。

5.5 免疫亲和色谱（IAC）

IAC的原理是将特异性的抗体固定于固相载体上，如琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶等，并装于柱中，然后通过抗原与抗体之间特异性结合来实现样品中目标物的分离净化，同时可对样品中目标物进行浓缩，从而提高检测灵敏度，具有选择性好、操作简单快捷、耗时少、节省试剂等优点，是一种重要的前处理手段。

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