动物源性食品中有害化学物质及污染物的检测——孔雀石绿

7.1.6.4 柱后衍生UVD检测

该方法是我国现行的水产行业标准和国家标准采用的检测方式，目前国内各政府部门的检测机构和生产加工单位普遍采用该检测方法。其原理是利用PbO2将无色孔雀石绿氧化成孔雀石绿，然后在618nm处检测，该方法对孔雀石绿检测限和无色孔雀石绿的检测限分别为4μg/kg和2μg/kg，该方法定性和定量的准确性都比较理想。

余培建建立了用HPLC检测底泥中孔雀石绿及其代谢物的方法。孔雀石绿的回收率为75.2%~79.1%，无色孔雀石绿的回收率为81.1%~84.2%，检测限均为5μg/kg。朱蕾在«水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量的测定»（GB/T 19857—2005）的基础上，对该方法进行了改进，使得方法简便，定量准确，精密度高，更适合于水产品中孔雀石绿及其代谢物无色孔雀石绿残留量的检测。马合勤等采用柱后衍生UVD测定了鱼体组织中孔雀石绿及其代谢物无色孔雀石绿的残留量，方法检出限为2μg/kg，孔雀石绿的回收率为91.8%~99.87%，无色孔雀石绿的回收率为78.02%~94.97%。孔雀石绿的相对标准偏差为0.89%~2.09%，无色孔雀石绿的相对标准偏差为1.27%~34.1%。施彩仙等采用SunFireC18色谱柱、氧化铅柱和DAD在619nm处，以乙腈-0125mol/LpH45乙酸铵溶液（80∶20，V/V）为流动相进行测定，孔雀石绿和无色孔雀石绿平均回收率为89%~107%，相对标准偏差为4.7%~6.1%。

但这种检测方法有很大的局限性，首先每次分析前必须在色谱柱后接上氧化柱，使无色孔雀石绿在氧化柱内继续氧化成孔雀石绿及其他衍生物，有可能出现组分间的相互作用，并且氧化柱中填料二氧化铅和硅藻土的氧化还原反应性能会逐渐减弱，直接影响柱子的寿命；而且柱后衍生容易造成柱后死体积增大，影响色谱分离效果。其次无色孔雀石绿是以孔雀石绿的形式经UVD检测。与高灵敏度的FLD相比，作为水产品中的主要代谢产物，检出限也很难满足要求。

7.1.7  LC-MS检测法

HPLC法的优势在于能对目标物进行定量分析，但并不能对检测结果给出可靠的定性结果，存在假阳性风险，一般还需要以MS进行定性分析确证。以LG-MS检测孔雀石绿，应用反相色谱柱分离目标化合物，分离原理与HPLC法相同，再运用MS检测的高选择性，进一步提高定性定量检测的准确性和灵敏度；此外，还可以用氘代孔雀石绿和氘代无色孔雀石绿为内标进行内标法检测，降低由于前处理过程中目标化合物的损失所带来的偏差，从而提高定量的准确性。

7.1.7.1单四极杆质谱

以单四极杆为检测器的LC-MS仪属于低分辨率质谱（质量分辨率只能达到0.5Da），检测结果背景干扰大，在低浓度水平的复杂基质中，阳性结果较难确证，故该方式不常用。

7.1.7.2离子阱质谱

离子阱质谱也属于低分辨率质谱，虽然它可以通过多级质谱来提高其定性的准确性，但仪器本身固有的质量歧视效应（1/3质量效应）、空间电荷效应、定量线性范围窄、质量准确度差等缺陷导致其定性和定量的准确性都不高。

吴学立等使用LC-线性离子阱-MS/MS技术和同位素稀释技术，以McIlvaine缓冲液和乙腈提取，OasisMCXSPE柱净化，洗脱液在SRM下测定，方法的检出限为0.03~0.05μg/kg，定量限为0.05~0.09μg/kg，5个不同加标水平鱼样中4种目标化合物的平均回收率为84.7%~105.1%，RSD为1.3%~14.9%（n＝5）。研究结果表明其灵敏度比三维离子阱可提高一个数量级。

丁涛等利用HPLC-MS/MS方法快速、准确地同时测定鳗中孔雀石绿、无色孔雀石绿残留量。鳗样品经乙腈-乙酸铵缓冲溶液提取，LC分配到二氯甲烷层，MCX阳离子SPE小柱净化，浓缩定容。以甲醇和甲酸缓冲溶液为流动相，经C18柱分离后，并用MS/MS在电喷雾（ESI＋）-SRM的模式下，以氘代无色孔雀石绿为内标，进行MS定性和定量。该方法检测限为0.2μg/kg，定量下限达0.5μg/kg，完全可以满足欧盟和日本的相关限量要求。

7.1.7.3飞行时间质谱

飞行时间质谱属高分辨率质谱，其质量分辨率可达到1mDa，它的高质量选择性有效地降低了背景干扰，定性定量准确性得到提高，该方法能满足各国相关法规对孔雀石绿检测的要求。主要在样品分析中，选择2个监测离子，其中1个离子用于定量、1个离子用于确证。

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