时间：2021-08-13 点击： 次 来源：中国兽医发布 作者：曲志娜 赵思俊等 - 小 + 大
| 6.2 ELISA 用包被抗原包被酶标板，明胶封闭，加入待检样品和抗ST单克隆抗体竞争反应，加酶标记羊抗鼠IgG，加邻苯二胺底物液显色，加2mol/L硫酸终止反应，用酶标仪检测。然后绘制标准曲线，求出回归方程和相关系数，从而求出样品中ST含量。 田禾菁等用ELISA检测ST，得出标准曲线的线性范围为0.01～1.0ng/mL，检出限为0.01ng/mL。在样品中加入1～100μg/kg不同浓度的ST，测得加标回收率为85%～115%。 6.3 高效液相色谱法（HPLC） 用HPLC检测时，使用Micro Bondapak C18柱，流动相为四氢呋喃-甲醇-水（5:1:4，V/V），流速为1.0mL/min，荧光检测时激发波长（λex）365nm，发射波长（λex）435nm，狭缝宽度为10nm。 用HPLC检测时标准溶液的配制：准确称取0.68mgST标准品，用2mL乙腈溶解，再用甲醇定容至25mL容量瓶中，摇匀后备用。取1mL高浓度标准溶液（27.19μg/mL），用甲醇-水溶液（70:30，V/V）定容至25mL容量瓶中，配成低浓度（1.09μg/L）的溶液，在上述色谱条件下，ST的保留时间为3.974min。 黄化成等用HPLC在加标量为2.0μg/kg时测得花生粕中ST的平均回收率为89.6%，在加标量为5.0μg/kg时测得混合饲料中ST的回收率为94.3%。 袁建等建立了检测小麦中ST含量的HPLC。在样品中的ST经正己烷提取后，采用国产硅镁型吸附剂制备层析柱净化后，运用HPLC测定，色谱柱为Nova-Pak C18柱，以甲醇-水（70:30，V/V）为流动相，流速0.7mL/min，检测波长为246nm。结果：该方法平均加标回收率为79.26%，RSD为3.84%，最低检出量为0.017μg/kg。 6.4 液相色谱-质谱联用（LC-MS） 将Waters Alliance2695液相系统连接到三重四极杆液质联用仪上，在分析ST时电喷雾探头采用正离子模式。流动相为含0.01%甲酸的乙腈和0.01%的甲酸水（75:25，V/V），采用C18色谱柱，流速为0.3mL/min，柱温为30℃。注射器为50μL，用ST标准品对质谱仪的参数进行优化。 Versilovskis等用LC-MS在小麦中进行ST的添加回收试验，并对污染ST的小麦、芥麦、大麦等谷物样品进行试验。由于基质效应的影响，因此在空白小麦样品中添加ST并绘制标准曲线，结果表明线性关系良好，小麦样品中的检测限为0.5μg/kg，样品回收率在97%以上，并且重复性良好。添加回收试验数据见表4-5。 Scudamore等用LC-MS对玉米、面包等进行ST的检测，得到玉米中的检测限为1.7μg/kg面包中为1.9μg/kg。 |
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