时间：2021-08-13 点击： 次 来源：中国兽医发布 作者：曲志娜 赵思俊等 - 小 + 大
| 5.2 样品净化 5.2.1 固相萃取柱净化 固相萃取一般有四个基本步骤：固定相活化、样品上柱、淋洗和分析物洗脱。其一般步骤是：将液态样品或溶解后的固态样品倒入活化过的固相萃取柱，然后利用抽真空或加压使样品进入固定相。固相萃取步骤中将目标组分先保留，不需要的组分先用一种溶剂冲洗掉，然后用另一种溶剂把目标分析物从固定相上洗脱下来。固相萃取柱净化法优点是方法简便，使用的有机试剂较少，对环境和试验人员的危害较小，但由于它对样品中毒素的作用力为非特异性吸附力，因此对毒素的净化纯度和回收率不可能同时达到很高。 5.2.2 硅镁吸附柱层析分离纯化 将硅镁型吸附剂置于烘箱中，130℃下烘干2h，放入干燥器中备用。使用前2d取出，称20g硅镁型吸附剂放在烧杯中，加1mL水混匀。密闭平衡48h使其活性符合使用要求。取长30cm、内径1cm的层析柱3支，分别加入经130℃烘干2h的无水硫酸钠1cm。加正己烷8mL，用玻璃棒轻轻搅动排出无水硫酸钠层内的气泡。在装有5mL硅镁型吸附剂的烧杯中加入15mL正己烷，轻轻搅动使其悬浮。打开层析柱下口活塞使柱内正己烷缓慢流出，同时将悬浮液分别倒入柱中，使其自然下沉，当正己烷下降至吸附剂层面以上3cm时，关闭活塞，分别加入无水硫酸钠2cm。然后将吸附柱中正己烷放出，使液面至上层无水硫酸钠表面。样品提取液上柱净化。当液面接近上层无水硫酸钠表面时，加入2倍体积的洗脱剂，以2mL/min流速洗脱。收集洗脱液，用氮吹仪挥干。最后用1mL甲醇水溶液（70:30）溶解。 6 检测方法 目前用于检测ST的方法有薄层色谱法（TLC）、ELISA、高效液相色谱法（HPLC）和液相色谱-质谱联用（LC-MS）等。TLC操作简单，不需要复杂精细的仪器设备；HPLC、LC-MS等检测灵敏度高、可靠性强，但需要昂贵的仪器设备和专门的操作人员，并且处理复杂，无法同时对大批量样品进行检测；ELISA灵敏度高，特异性强，预处理简单，且不需要昂贵的仪器设备，但其前提条件是先制备ST抗体，限制了ELISA在生产实际中的使用。 6.1 薄层色谱法（TLC） 目前我国在食品上已有检测ST的国家标准，其原理是将样品中的ST经提取、净化、浓缩、薄层展开后，用三氯化铝显色，再经加热产生一种在紫外光下显示黄色荧光的物质，根据其在薄层上显示的荧光最低检出量来测定样品中ST的含量。 样品经提取后进行点样：取两块10cm×10cm薄层板，在距板下端0.8～1cm处各添加10μL标准使用液（1.0μg/mL），在左边缘4cm处各添加80μL样液，然后再在第二块板的样液点上加滴10μL标准使用液（1.0μg/mL）。之后进行展开，常用横向展开剂为15.6mL乙醚-正己烷-苯-三氯甲烷-甲酸（3:9:15:15:06，V/V），纵向展开剂为15mL苯-甲醇-冰乙酸（90:8:2或925:6:15，V/V）。最后进行显荧光，用三氯化铝-乙醇溶液，置80℃加热10min，立即在紫外光灯（波长365nm）下观察结果，待薄层板冷却后再薄薄地喷第二次（不需加热），可直接观察结果，根据其在薄层上显示的荧光最低检出量来测定样品中ST含量。 胡伟莲等对玉米、豆饼、菜籽饼、棉籽饼、小麦等饲料进行ST的添加回收试验，结果表明各饲料的回收率均大于88%，RSD为2.3%～3.4%。 Stroka等从各种谷物中提取ST，经固相萃取（SPE）净化后用TLC测得谷物中ST的检测限为2μg/kg。ST的分离和鉴定是通过高效薄层色谱（HPTLC）板。通过对HPTLC板的加热来实现对衍生化的光密度的测定，在板上ST为高密度的荧光点。使用该检测方法的回收率均较高，其中小麦中回收率在80%左右。 |
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